中压色谱柱应用介绍.ppt

如果被分离化合物的溶解度很低，超载一般都是以增加 进样体积来实现的。这种超载进样称之为体积超载： 增加进样体积将导致峰变宽，并且渐渐趋近于矩形， 但是色谱峰依然保持对称。 当体积不断增大时，色谱峰会出现重叠甚至变形。 体积超载 当进样的样品质量超过一定量，样品在色谱柱的浓度会很高，以至色谱平衡被破坏。这种情况称为质量超载。质量超载的情况比体积超载要复杂的多。在质量超载情况下会出现三种效应： 散射效应样品在流动相的作用下会沿着柱子散布直至与固定相充分的接触达到平衡。这种现象会导致色谱带增宽。 填料的失活由于大量的样品进入色谱柱导致填料的活性基团被占据。从而改变了流动相的极性作用。其结果是保留时间减少。 非线性吸附等温线由于样品浓度高，色谱峰产生拖尾 质量超载 0.18 mg 16.9 mg 8.1 mg 填料容量 检测器 最常用的检测手段 在一至两个波长下给出化合物的相对吸光率 信号是基于比尔定律 A=eBC A=吸光率 e =分子在指定波长下的吸光率 B=光程长度 C=浓度 色谱信号取决于样品浓度及分子吸光率。 较为便宜 紫外检测器 近乎通用型检测手段 – 分析物的挥发性必须低于洗脱液 – 与分子吸光度及离子化无关 信号只取决于分析物的质量或浓度 没有定性数据，只有定量数据 可以使用梯度洗脱，但是需要分流 ELSD检测器 近乎通用型检测手段 直接连接检测器，不用分流，回收率高。 不可以使用梯度洗脱 RI检测器 质谱检测器（实验室）在线离子导向 ? 直接将MS连接在色谱流路上进行实时检测。 ? 可以按照指定质量数选择性地收集馏分 ? 需要十分复杂的系统流路及十分精确的分流方案 主动分流器 ?提供样品的离子数据 ? 如果样品可以离子化，就可以有效地定量分析信号的 强弱取决于离子碎片的浓度 制备条件： 色谱柱：Flash C18（20-45 μm 100 ? 12 g四支串联）； 流动相：A: 0.1%FA水溶液 B: 乙腈 检测器：UV 260 nm（红线），210 nm（蓝线）； 流 速：20 mL/min； 上样量：0.5 mL 检测条件： 分流比：500:1 辅助泵流速：0.2 mL/min 辅助泵流动相：甲醇：水=70:30 离子源：ESI 模式：Pos 分子量范围：150-600Da 数据输出端口：AO1 Cheetah工作站option：DAQ -5~5V 质谱数据参数设置：Output1 Max Intensity 100*109 Max Voltage 5 中压质谱联用案例 馏分收集 仅收集峰的中间部分，峰的开始部分及结尾部分不要。 这种收集方式的特点是组分的纯度大大提高。 收集方式 收集方式 discarded 88 % 88 % B 12 % A 88 % A 12 % B 98 % A 2 % B 98 % B 2 % A 收集方式 微量组分分离 谢谢！ 客服：400-606-8099 网站： 邮箱：yunhua_li@ * * * * * * * * * * * * Advion 单四极质谱，美国进口，价格有优势 * * * * * 中压快速制备色谱培训 李运华 博纳艾杰尔 如何快速高效的完成分离 选择合适的洗脱梯度 选择合适的柱子规格 选择合适的洗脱溶剂 选择合适的上样方式，及上样量 选择合适的洗脱梯度 快速纯化中的洗脱类型 TLC方法建立 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0rigin Rf Flow ------- 10.00 5.00 3.33 2.50 2.00 1.67 1.43 1.25 1.11 1.00 CV Flash Flow TLC 最优的 Rf (0.15 – 0.35) 洗脱过程需要考量的参数如下 最优的分离度 最大的进样 最小的溶剂损耗 TLC方法与柱层析的关系 B A B A B A 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Column Volumes 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 .9 .8 .7 .6 .5 .4 .3 .2 .1 0 1 .9 .8 .7 .6 .5 .4 .3 .2