紫外可见分光光度计.pdf

无机及分析化学 15-1 15章 紫外－可见吸光光度法 §15－1 紫外 可见吸光光度法概论 利用被测物质的分子对紫外 可见光具有选择性吸收的特性而建立的分析方法称为紫 外 可见吸光光度法。在生物试样的分析工作中，紫外 可见吸光光度法是常用的分析方 法之一。 -1 -3 -1 如有一生物试样含铁量为0.01mgg 。试样经处理后，用1.810 molL 的KMnO4 溶液 滴定，到达化学计量点时，所用KMnO4 溶液的体积为0.02ml 。而通常滴定管的读数误差就 有 0.02ml ，显然用滴定法测定该试样中的含铁量是不合适的。但是，在适当的反应条件下 加入一种试剂（如磺基水杨酸），使它与 Fe3+生成紫红色螯合物，即可用吸光光度法测定 其含量。 15.1.1 紫外 可见吸光光度法的特点 -3 -6 -1 具有较高的灵敏度 一般物质可测到10 10 molL 。适用于微量组分的测定。 有一定的准确度 该方法相对误差为2%5%，可满足对微量组分测定的要求。如一试 样含铁量为0.020mg，相对误差5%，其含量在0.0190.021 mg 之间，该结果是令人满意的。 操作简便、快速、选择性好、仪器设备简单。近年来由于新显色剂和掩蔽剂的不断出 现，提高了选择性，一般不分离干扰物质就能测定。 应用广泛 可测定大多数无机物质及具有共轭双键的有机化合物。在化工、医学、生 物学等领域中常用来剖析天然产物的组成和结构、化合物的含量的测定及生化过程的研究 等。 15.1.2 物质对光的选择性吸收 绿 溶液之所以呈现不同的颜色，是与它对光的选择 黄 青 性吸收有关。当一束白光（由各种波长的色光按一定 比 组成）通过一有色溶液时，某些波长的光被溶液 吸收。另一些波长的光不被吸收而透过溶液。人眼能 橙 白光 青蓝 感觉的波长在400760nm，为可见光区。溶液的颜色 由透过光波长所决定。 如，KMnO4 溶液强烈地吸 红 蓝 收黄绿色的光，对其它的光吸收很少或不吸收，所以 紫红 溶液呈现紫红色。又如CuSO 溶液强烈地吸收黄色的 4 光，所以溶液呈现蓝色。如溶液对白光中各种颜色的 光都不吸收，则溶液为透明 色，反之，则呈黑色。 图 15-1 有色光的互补色 如果两种颜色的光按适当的强度比例混合后组成白 光，则这两种有色光称为互补色，如图 15-1所示。 成直线关系的两种光可混合成白光。各种物质的颜色的互补关系列于表 15-1 中。 15-1 物质颜色(透过光) 与吸收光颜色的互补关系 物质颜色 黄绿 黄 橙 红 紫红 紫 蓝 绿蓝 蓝绿 吸收光颜色 紫 蓝 绿蓝 蓝绿 绿 黄绿 黄 橙 红