人类精液检验与处理实验室手册第五版 下.doc

3.3 精子-宫颈粘液相互作用 在月经周期（中期）中，当雌激素使宫颈粘液变得易为精子穿透时，精子才可在这一有限的时间内穿透宫颈粘液。精子穿透宫颈粘液时间的长短变化范围很大，因妇女个体而异。即使同一个体，不同的月经周期也不尽相同。因此，只有对不同月经周期进行重复试验，才能对精子-宫颈粘液相互作用的异常作出结论。 注：请参阅资料附录5的宫颈粘液的收集，储存和特性评价。 注释：当一个人不能提供一份精液样本时，性交后试验（见3.3.1节）可以提供一些有关他精子的信息。 3.3.1 体内试验 目的 性交后试验的目的是确定性交后数小时内宫颈粘液（粘液的储存作用）中活跃精子的数目，评估精子存活数目（Sobrero MacLeod，1962）和精子的活动情况（Moghissi，1976）。此信息可用于评价男性或女性伴侣阳性抗精子抗体的意义。 时间选择 性交后试验应尽可能靠近排卵期进行，排卵期可以根据一些临床指标，例如一般情况下的周期长短，基础体温、宫颈粘液的变化，阴道细胞学检查，血清或尿中雌激素水平及卵巢超声排卵检查。对于一个试验室来说，重要的是使性交后检查宫颈粘液的时间标准化，这一时间应是9～14小时。 指导病人 对于准备进行性交后试验病人应告知进行检测的最适时间，同时告知下述事项： 1.试验前至少2天男方要避免性生活及手淫。 2.在约定检验时间的前一天晚上同房。 3.在同房的过程中不能使用任何阴道润滑剂，也不能在性交后进行阴道冲洗（在性交后可以淋浴，但不可使用盆浴）。 4.次日向医生报告您已可以进行检验。 步骤 1.先置入未使用润滑剂的阴道窥器。 2.用不带针头的结核菌素注射器、移液管或聚乙烯管在阴道后穹窿部吸取混合样本。 3.再用另一个注射器或导管吸取宫颈管内的粘液标本。 4.将一滴宫颈粘液标本置于载玻片上用盖玻片（规格22 mm × 22 mm）铺平，制备物的厚度可用硅化的100μm玻璃珠进行标准化(Drobnis等, 1988)的控制（见框3.1）。 5.在光学显微镜下以×400放大观察。 注：只有可靠且无血液污染的粘液样本才能保证检验结果的准确性。 框3.1石蜡油混合物的制备 应预先准备好蜡与石油的混合物于室温下储存备用。可在烧杯中熔化蜡(熔点为48-66°C)，用玻璃棒在烧杯中混合矿脂。混合完成后让其自然冷却。当尚有余温时，将其吸入3ml或5ml注射器(无针头)。一旦混合物固化，使用装载注射器提取。 阴道中的精液样品 精子在阴道内两个小时就会失活。观察阴道中精子涂片的目的 (参见2.4.2节)是保证精液确实曾存在于阴道内。 宫颈粘液样品 精子在宫颈管较低位置的数量取决于时间长短。在性交以后的二个到三个小时之内，有大量精子储积在子宫颈管的较低位置。 穿过宫颈粘液的精子数目的评估一般采取计数高倍镜视野下所见精子数目的方法(参见框3.2)。推荐以粘液中的精子浓度为标准单位（精子数/mm3）表示。 框3.2 显微镜下所能观察到的宫颈粘液的体积取决于显微镜视野的面积和槽的深度(πr2，π约取3.142，r是显微镜视野的半径)。显微镜视野的直径可以通过载物台上的刻度尺或是目镜的孔径除以物镜的放大倍数进行估量。如孔径为20mm的×10倍的目镜和×40的物镜，其显微视野的直径约为500μm（20mm/40），则其半径为r=250μm，r2=62 500μm 2, πr2 = 196 375μm 2 ，其体积为19 637 500μm 3 即大约t 20 nl。 因此在放大倍数为400，涂片厚度为100μm，这种情况下计数为10个细胞/HPF则大约为10个/20nl，即等于约500个细胞每μl。然而，因为计数的细胞的总数很低，故抽样误差高。对于10个细胞的样本误差的报告在表2.2中（约为32%）。 精子在子宫颈粘液中的活力分级如下： ● PR = progressive motility;快速前向运动性; ● NP = non-progressive motility; 非快速前向运动性; ● IM = immotile spermatozoa. 非活动精子 正常宫颈功能的最重要指标是精子在其中表现为快速前向运动。 解释 ●如果未在粘液中发现精子则为测试阴性。 ●排除其它明显的性交后宫颈因素，如果在性交后9-14小时内没有在宫颈粘液内发现快速前向运动的精子，或是男方或女方存在抗精子抗体，均有可能是造成不育的因素（Oei等，1995）。 ●当观察到非快速前向运动精子表现出一种颤动现象时，则可推断宫颈粘液或是精子表面存在抗体。 注：如果最初的结果是异常或阴性，应该重复性交后的试验。 注释1：如果在宫颈管或在阴道样品中未发现精子，应该询问夫妇以证实阴道内射精的发生。 注释2：试验阴性或归结于不当的时间。在有生育力的妇女中，于月经周期内