Treg 研究方法指南.ppt

Treg 细胞研究方法及相关产品 一、研究背景 三、Treg细胞功能 二、Treg细胞发育 五、Th细胞亚群比较 四、研究意义 报告内容 七、产品信息 六、研究方法 研究背景 Treg细胞与感染，炎症，自身免疫病和肿瘤等疾病有着密切的关系，可能通过分泌IL-10和TGF-b等因子及表达Foxp3 ,GARP发挥免疫抑制作用。 是一种可以调节其他多种免疫细胞功能的T 细胞亚型，是维持机体免疫细胞等内环境稳定的重要成员之一。 Treg细胞 Treg细胞分为CD4+Treg和CD8+Treg 两类。 CD4+CD25+Foxp3+是研究热点。 Treg可以大致分为两类：天然Treg和适应性Treg（诱导的Treg）。 天然Treg是一种CD4+CD25+Foxp3+T细胞，其来源于胸腺，迁移至外周发挥免疫稳态作用。适应性Treg是一种非调节性CD4+T细胞其在胸腺以外的组织中由癌症，炎症和自身免疫性疾病诱导表达CD25（IL-2Ra）。 天然Treg和诱导性Treg发育 CD4+CD25+Treg 可以抑制免疫系统的功能及相关免疫细胞的活性，从而发挥免疫抑制作用。 TGF-b可以诱导CD4+CD25+Treg增殖和分化。 研究表明Treg细胞能以依赖细胞因子如IL-10和TGF-b 等和GARP等表面分子的细胞接触发挥免疫负调节作用。 Treg 细胞的功能 Treg 与Th，APC相互作用 Treg 细胞表面分子表达及功能 Treg 细胞的性质 性质 天然 Treg (nTreg) 诱导 Treg (iTreg) - Tr1 诱导Treg (iTreg) - Th3 发育部位 胸腺 外周(MALT) 外周(MALT) 表型 CD4+CD25+CD127low CD4+CD25- CD4+CD25+ from CD25- precursors 其他表面标志 CTLA-4+GITR+Foxp3+ CD45RBlowFoxp3- CD25low-variableCD45RBlowFoxp3+ 抑制作用机制 Contact, Granzyme-B 依赖, 分泌 TGF-b IL-10 介导 TGF-b 介导 靶细胞 APC 和 效应 T 细胞 效应 T 细胞 未知 CD28 参与 胸腺发育和外周维持 非发育和功能必须 非发育和功能必须 体内作用 抑制自身反应性T细胞 粘膜免疫和炎症反应 粘膜免疫和炎症反应 体外扩增 TCR/CD28 刺激 和IL-2 CD3, IL-10, 维甲酸 CD3, TGF-b Treg参与很多疾病的致病机制： 肿瘤免疫逃逸 疫苗免疫效果 自身免疫性疾病 急性和慢性感染性疾病 …… Treg细胞研究意义 T细胞亚群比较 研究方法 流式细胞术：表型，细胞因子 ELISA和ELISPOT 免疫组化（Foxp3） Treg细胞分离纯化（免疫磁珠和流式分选） 体内和体外诱导分化实验 体外和体内中和实验（功能纯化级抗体） C57BL/6J小鼠脾脏冰冻切片，anti-Foxp3 抗体染色（克隆：FJK-16S ，Cat#14-5773）