单元六 微生物测定技术.ppt

目 录 第一节 测定微生物生长繁殖的方法 一、测定微生物生长繁殖的方法 二、测定微生物细胞的数量 第二节 微生物的生长规律 一、无分支单细胞微生物生长规律 二、丝状微生物生长规律 * 内容回顾 1、土壤表层以下__________厘米范围微生物数目最多。 2、土壤中微生物数目最多的是_____。 A.细菌 B.放线菌 C. 真菌 D.原生动物 3、自然界筛选微生物菌种一般分为______、___________、_______、________4个步骤。 4、微生物纯种分离的方法有_________、___________、_________。 回 顾 单元六 微生物测定技术 学习目标 知识目标 掌握微生物生长的群体规律。 掌握微生物生长的测定方法。 技能目标 能够测定样品中微生物总数和菌落数。 能够测定不同环境中微生物数量。 重点 微生物数目的测定。 第一节 测定微生物生长繁殖的方法 概 念 微生物在适宜的环境条件下就会不断吸收营养，按自身方式进行新陈代谢。 生长——微生物细胞吸收营养物质，进行新陈代谢，当同化作用异化作用时，生命个体的重量和体积不断增大的过程。 繁殖——生命个体生长到一定阶段，通过特定方式产生新的生命个体，即引起生命个体数量增加的生物学过程。 在微生物学中把从一个细胞或一群相同的细胞经过培养繁殖而得到的后代,称纯培养。 在微生物学中培养和发酵两个概念是相同。在工业上大规模的进行微生物培养称为微生物发酵。 一、测定微生物的生长量 （一）重量测定法 一、测定微生物的生长量 将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出来,然后烘干(干燥温度可采用105℃、100℃或80℃)、称重。一般干重为湿重的10%—20%，而一个细菌细胞一般重约10-12—10-13g。 该法适合菌浓较高的样品。 如大肠杆菌一个细胞一般重约10–12～10–13g，液体培养物中细胞浓度达到2×109个/ml时，100ml培养物可得10～90mg干重的细胞。 （二）细胞组分含量测定法 一、测定微生物的生长量 1.蛋白质含量测定法 蛋白质是微生物的细胞主要成分，含量较稳定。一般细菌含氮量为干重的12.5%，酵母菌为7.5%，霉菌为6.0%。 蛋白质含氮量为16%。 蛋白质总量=含氮量×6.25 （二）细胞组分含量测定法 一、测定微生物的生长量 2.DNA含量测定法 DNA是重要的遗传物质，含量较恒定。 DNA与3、5-二氨基苯甲酸-盐酸结合能显示特殊荧光，测定荧光强度，可算出DNA含量。 一、测定微生物的生长量 （三）菌丝长度测定法 该法适用于对丝状真菌生长长度的测定。 方法：将真菌接种在固体培养基的平皿中央，定时测定菌落的直径或面积，直到菌落覆盖整个平皿。 缺点：不能反映菌丝的纵向生长，不能计算菌落的厚度和培养集中的菌丝。接种量也能影响结果，不能反映菌丝的总量。 一、测定微生物的生长量 （四）生理指标测定法 通过测定活细胞的生理指标测定微生物的生长量。耗氧量、呼吸强度、酶活性、生物热等。 微量量热计 瓦勃式呼吸仪 二、测定微生物的细胞数量 （一）总菌数测定法 1.显微镜直接计数法 原理：将1cm2×0.1mm的薄层空间划分为400小格，从中均匀分布地选取80或100小格，计数其中的细胞数目，换算成单位体积中的细胞数。 适用范围：个体较大细胞或颗粒，如血球、酵母菌等。不适用于细菌等个体较小的细胞，因为（1）细菌细胞太小，不易沉降；（2）在油镜下看不清网格线，超出油镜工作距离。 特点：快速，准确，对酵母菌可同时测定出芽率，或在菌悬液中加入少量美蓝可以区分死活细胞。 2.电子计数器法 方法：在计数器中放有电解质及两个电极，将电极一端放入带微孔的小管，通电抽真空，使含有菌体的电解质从小孔进入管内。当细胞通过小孔时，电阻增大，电阻增大会引起脉冲变化，则每个细胞通过时均被记录下来。因样品的体积已知，故可以计算菌体的浓度，同时菌体的大小与电阻的大小成正比。 该方法方便、快捷，但不能测定含有颗粒的菌液，对链状和丝状菌无效。 3、比浊法（比色发） 原理:在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比，即与光密度成正比，菌数越多，光密度越大。因此，借助于分光光度计，在一定波长下测定菌悬液的光密度，就可反应出菌液的浓度。 特点：快速、简便；但易受干扰。 二、测定微生物的细胞数量 （二）活菌数测定法 1.平板菌落计数法 技术要求：样品充分混匀，操作熟练快速（15~20min完成操作），严格无菌操作。 注意事项：每一支吸管只能用于一个稀释度，样品混匀处理，倾注平板时的培养基温度。 适用范围：中温、好氧和兼性厌氧、能在营养琼脂上生长的微生物。； 误差：多次稀释造成的误差是主要来源，其次还有由于样品内菌体分布不均匀、以