选1-3-1(学案)菊花的组织培养.doc

课题1 菊花的组织培养 一、基础知识 （一）植物组织培养的基本过程 1.细胞分化 （1）概念：在个体发育中，相同细胞的后代在______、______、____________上发生稳定性差异的过程。 （2）过程：如：受精卵增殖→生长→分化形成组织、器官、系统。 （3）特点： ①持久性：是一种持久性的变化，它发生在生物体的整个生命过程中,在______期达到最大限度。 ②稳定性：细胞分化是稳定的，一般是____________的。 ③全能性：已分化的细胞，仍具有发育成完整个体的潜能。 （4）结果：形成不同的细胞和组织。 （5）原因：______________________________________________________的结果。 2.细胞全能性 （1）定义：生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能的特性。 （2）原理：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因。 （3）实例：已分化的植物细胞，仍具有全能性。高度特化的动物细胞，从整个细胞来说，全能性受到限制。但它的细胞核仍然保持着全能性，这是因为__________________ ______________________________________________________。 （4）全能性的比较: 受精卵生殖细胞体细胞。 3.植物组织培养 （1）必要条件：①细胞离体；②一定的营养物质、激素和其他外界条件。 （2）原理:细胞的全能性 （3） 过程： 离体的植物器官、组织或细胞 （又叫外植体 ） 脱分化 愈伤组织：（细胞排列疏松而无规则是一种高度液泡化呈无 定形状态的薄壁细胞 ） 再分化 根、芽 完整植物体 （4）相关概念: ①外植体：______________________________________________________。 ②脱分化：由高度分化的植物组织或细胞____________的过程，称为植物细胞的脱分化，或者叫做去分化。 ③再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。 ④愈伤组织: __________________,是高度液泡化的、成无定形状态的薄壁细胞。 （二）影响组织培养的因素 1.外植体的选取 不同植物的组织培养难度不同；同一种植物的不同组织培养难度不同。 菊花的组织培养一般选择__________________________________________。 2.培养基的配制(MS培养基) 大量元素：N、P、K、Ca、Mg、S； 微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co 有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等。 植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等。 3.不同植物激素浓度，使用顺序和使用量 使用顺序 实验结果 先生长素，后细胞分裂素 有利于分裂但不分化 先细胞分裂素，后生长素 同时使用 分化频率提高 生长素细胞分裂素比值 结果 比值高时 促根分化，抑芽形成 比值低时 有利于芽的分化、抑制根的形成 比值适中 促进愈伤组织生长 4.消毒 在培养的整个过程中，都需要是一个______环境。 5.pH、温度、光照 菊花： pH=______；温度控制在______℃； 每日用日光灯照射______h。 二、实验操作 （一）MS固体培养基制备 1．配置各种母液 ①无机物中大量元素浓缩______倍，微量元素浓缩______倍，常温保存。 ②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液。 ③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。 2．配制培养基 ① 配制培养液；② 调PH；③培养基的分装。 分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml。由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素。 3．灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌。 （二）外植体消毒 1．选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝。 2．消毒 ①流水冲洗：菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右。 ② 酒精处理：用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动______次，持续______s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗。 ③消毒液处理：取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在无菌水中至少清洗______次，漂净消毒液。 （三）接种 1．接种室消毒 污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空气消毒， 酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫