环介导等温扩增技术检测卡氏肺孢子虫研究.pdf

虫堡邀竺翅堂麴鱼蕉堂盘查!塑!生鱼旦笠!!鲞笠鱼翦￡!亟』丛i!!坐丛!望婴!!尘：坦塑!塑!：!尘：!墨，盟!：垒 ·565· ．免疫检测． 环介导等温扩增技术检测 卡氏肺孢子虫的研究 杨秋林 张如胜伍和平 王可耕 张愉快 【摘要】 目的环介导等温扩增(LAMP)技术检测卡氏肺孢子虫(Pc)。方法醋酸可的松经 皮下注射Wistar大鼠诱导Pc，收集支气管肺泡灌洗液(BALF)提取n基因组DNA。设计4条扩增Pc 线粒体核糖体大亚基(mtrRNA)基因的LAMP引物，以结核杆菌、肺炎支原体、肺炎衣原体、弓形虫、大 DNA 鼠白细胞为对照，进行LAMP反应。LAMP产物经显色、电泳及酶切鉴定。将Pc 10倍稀释后同 时进行LAMP和PCR，比较其敏感性。结果Pc检测管经显色后呈绿色(阳性)，对照组均呈棕色(阴 性)。PcLAMP产物经电泳后呈LAMP特征性梯状条带，扩增产物经Tail限制性内切酶酶切鉴定正 确，对照组均无扩增产物。LAMP可检测到虫体DNA的最低浓度是1Pg／仙l，为PCR的10倍。结论 检测Pc的LAMP方法敏感、特异及简便。 【关键词】卡氏肺孢子虫；检测；环介导等温扩增技术 of Detection cariniiDNA isothermal Pneumocystis byloop-mediatedamplification洲旧Qiu．1in． ZHANG Ru—sheng，WU He-ping，WANGKe-geng，ZHANGYu—kuai．DepartmentofParasitology。Medical Nanhua Collegeof University。Hengyang铊J001．China author：YANG Corresponding Qiu—Zin．Entail：hyyql@yahoo．com．en detect To isothermalam— 【Abstract】objective Pneumocystiscarinii(Pc)DNAbyloop—mediated After with acetatefor8 bronchoalveolar plification(LAMP)．Methodsinjectedhydrocortisoneweeks．the Wistarratswerecollectedanda ofBALFwereexaminedfor Pcor- lavagefluid(BAI．F)0f portion identifying ganisms PcDNAwa$extracted extraction．Fourwhich usingmicroscope．Then byphen01．chlorofcIrnl primers 6distinct onthemtrRNAofPc were andusedforLAMP evaluate recognized regions gene designed assay．To the ofthe andrat specificity assay．M．tuberculosis，M．pneumoniae。C．pneumoniae，T．gondiileucocyte wereusedas controls．Tothe oftheLAMPtothatofconve