MALDI-TOF MS技术在临床微生物检验中应用进展.pdf

·2708· ．讲座． MALDI．TOF MS技术在临床微生物检验中的应用进展 鲁辛辛冯伟明 顾秀丽 目前，国内大多数临床微生物实验室仍采用传统鉴定方 定方法十分简单，一种为取少量菌落直接点靶，加1Ixl基质 (a．腈基4．羟基肉桂酸溶于10％三氟乙酸与70％乙腈制成 法，如API或Vitek系统，但耗时、高成本及鉴定能力有限是 显而易见的制约瓶颈。16SrDNA测序可直接进行无菌标本 的过饱和溶液)充分混匀，干燥后上机；另一种将少量菌落溶 微生物鉴定，但方法的标准化、标本前处理以及时效性均未 解于蛋白提取液(10％三氟乙酸+70％乙腈等量混匀)10斗l 得到解决，因此难以成为常规技术。2006年，Fox…在 中，充分研磨裂解，1山裂解液点靶，再加l¨l基质，干燥后 Journal ofClinicalMicrobiology上发表了第一篇有关质谱技上机。 术在临床微生物应用的文章，引起同行关注，他认为该技术 二、MALDI-TOFMS的常规应用 1．MALDI．TOF 鉴定细菌还有许多技术难题要克服，不易成为常规方法，但 MS常见细菌鉴定：通过菌落快速鉴定是 是2009年后微生物质谱技术迅速风靡欧洲、北美和亚洲的 质谱技术的一大优势，近年临床微生物领域发表了大量有关 一些国家。基质辅助激光解吸电离离子源和飞行时间质量 质谱技术的应用论文。2011年，张明新等”1首次在国内应 timeof laser ionization 分析器质谱(matrix—assisteddesorption 用MALDI—TOF mass MS)技术吻合了微生物 TOF flight spectrometry，MALDI-TOF 专家的期待：操作简单、鉴定迅速、低运行成本及自动更新的 数据库心]。在微需氧菌、厌氧菌、真菌及分枝杆菌等难培养 微生物鉴定方面表现尤为突出，鉴定时间由数天推进到以分 钟和秒计算。新开发项目更是令人鼓舞，如无菌体液的直接 rDNA测序确认， (56／60)。15株鉴定不符的菌株经16S 鉴定、耐药表型识别、致病毒素分析以及医院感染病原体遗 MS鉴定符合率分别为 Vitek2．Compact和MALDI-TOF 传溯源等p…。 MS对疑 一、MALDI．TOFMS的基本原理 难病原菌鉴定更符合分子测序。Sogawa等∞1将从临床实验 MALDI．TOF MS主机由两部分组成，即基质辅助激光解 室获得的468株菌落直接点靶进行MALDI—TOFMS鉴定，种 吸电离离子源(MALDI)和飞行时间质量分析器(TOF)。其 工作原理是基于不同的微生物种类具有不同的蛋白质谱图， 468)。数据显示，MALDI—TOFMS能通过直接点靶或简单的 000000 而MALDI．TOFMS可电离相对分子质量为100一l 前处理方法，准确鉴定临床常见G+细菌和G一细菌，如葡萄 的生物分子，电离后不同的离子又具有不同的质／荷比 球菌属、链球菌属(个别Ot溶血性链球菌除外)、放线菌属、 (m／z)，质谱能找出种间和株间特异保守峰作为生物标记从 奴卡菌属、棒状杆菌属、红球菌属、肠杆菌科细菌、嗜血杆菌 而将其区分开。所以MALDI的具体原理是