REP-PCR技术在平菇栽培菌株鉴定中应用.pdf

2008年第2期 REP--PCR技术在平菇栽培菌株鉴定中的应用 何培新1，刘 伟1，郭 恒2，程 雁2，申进文3。 (1．郑州轻工业学院食品与生物工程学院，河南郑州450002；2．河南省科学院生物研究所，河南郑州450008I 3．河南农业大学生命科学学院，河南郑州450002) 对供试平菇菌株扩增出的条带清晰，重复性好，多态性高。聚类分析表明，在聚类重新标定距离为 11时，23个供试茵株聚类为六大类群I在聚类重新标定距离为17时，23个菌株聚类为四大类群： 杏鲍菇、白灵菇和秀珍菇为独立的类群，20个糙皮侧耳栽培茵株聚类在一起。因此，REP—PCR技 术可以应用于侧耳属种及菌株水平的鉴定。 关键词：REP—PCR技术；平菇I茵株鉴定；聚类分析 中图分类号：S646．1+4文献标识码：A 平菇(Pleurotus 平菇栽培菌株进行鉴定，对平菇生产和育种具有一 spp．)是侧耳属的真菌，是我国 第一大食用菌。河南是中国平菇栽培大省，2005年定的理论和实际意义。 总产量为63万t，占全国平菇总产的20％以上。目 1材料和方法 前我国平菇栽培品种的名称比较混乱，同物异名、同 名异物现象时有发生，给生产和科研等带来诸多不 1．1供试茵株 共收集了23个平菇栽培菌株：豫2(编号1，下 便。近年来，ISSR，RFLP，RAPD等分子标记以及 rDNA序列分析、ITS序列分析等分子生物学技术 用于平菇生产菌株鉴定的研究较多，对平菇栽培和 菌种选育具有重要的现实意义[1tz]。 (18)、黑平王(19)由河南省科学院真菌试验场提供， REP(repetitiveextragenicpalindrome，基因外 重复回文序列)家族序列由38bp构成，含有6个非 常保守位点及5bp构成的位于非常保守的回文臂 之间的保守环。与REP相似的序列重复分布于大 由华中农业大学菌种试验中心提供。 肠杆菌(Escherichiacoli)和鼠伤寒沙门氏菌(Sal- monella 1．2仪器和试剂 typhimur)基因组内口]。REP在细菌基因 ULTRA—LUMOMEGA 组中存在着菌株、种、属水平上的分布和拷贝数量的 10凝胶成像系统为 2 差异，而序列本身在进化过程中又具有较强的保守 美国OMEGA公司产品，PXPCR扩增仪为美国 ThermoElectron 性，非常适合作为PCR引物的对象。根据REP这 段高度保守的重复序列设计引物，扩增两段REP之 (BioRad DNAMarker 间的片段，提出了REP—PCR技术[‘]。 荷兰Biowest产品，lkb P，PCR扩增 REP—PCR技术主要应用于细菌、链霉菌等原 核微生物种及菌株的分类鉴定口山1；同时，也有应用 工生物工程有限公司，其他试剂为国产分析纯。 于一些植物病原真菌菌株分类鉴定和遗传多样性分 1．3试验方法 析的尝试[7’83；但没有应用于食用菌菌株分类鉴定1．3．1 基因组DNA的提取保存的供试菌株接