RNAi技术在转基因猪中应用研究进展.pdf

中国畜牧兽医 2013年第40卷第1l期 遗传繁育 ·153· RNAi技术在转基因猪中的应用研究进展 邹娴1。徐志谦2，吴珍芳2，李剑豪1，蔡更元1 (1_广东省农业科学院畜牧研究所，畜禽育种国家重点实验室，广东广州510640 2．华南农业大学，广东广州 510600) 摘要：RNAi技术介导的转基因小鼠的出现，预示着在哺乳动物整体水平上研究靶基因的敲除成为可能。目前，针对家畜 基因猪为代表，阐述了RNAi技术在哺乳动物细胞中特殊的现象及最有应用前景之一的抗病毒逃逸方法，并详细介绍了 RNAi技术在抗病转基因猪中的研究进展。 关键词：RNAi；转基因猪；抗病 中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1671-7236(2013)11-0153-04 RNAi(RNA interference，RNAi)，又称反义在哺乳动物细胞中也是一种保守的RNA沉默机制 RNA(anti—sense RNA)，是指在进化过程中高度保 RNA，dsRNA) 守的、由双链RNA(double—stranded 转录后水平上通过迅速破坏同源mRNAs而起作 诱发的同源mRNA高效特异性降解的现象(Guo 用。但在哺乳动物细胞中，dsRNA(30bp)会触 等，1995)。近十几年来，RNAi越来越多的应用于 发非特异性转录水平和翻译水平的抑制及一种导致 人类疾病治疗研究。最近几年，RNAi也开始应用细胞增殖受阻甚至凋亡的干扰素反应(Reynolds 于动物疾病的研究，并发展迅速，特别是猪病毒病。 等，2006)，并不能引起同源的靶基因沉默。其中，干 因为通过单一的疫苗免疫手段已经难以有效地控制 扰素可以激活非特异性的基因沉默反应，以保护机 猪病毒性传染病的发生，且近年来出现的大规模、新 体免受微生物感染，当哺乳动物细胞感染病毒时，干 的传染病，给畜牧业和养殖业带来了前所未有的挑 战，促使人们不得不寻求新的、更有效的防疫途径。 的RNAi过程将共同发挥作用。 1 哺乳动物细胞中的RNAi现象 2组合RNAi方法防止病毒的逃逸 RNAi机制的一个主要作用就是抵抗病毒的感 病毒在基因组复制过程中有较高的突变率，其 染。在哺乳动物细胞中人工诱导的抗病毒的RNAi 中RNA病毒的突变率为10～，DNA病毒的突变率 可以抵抗大部分致病性病毒的感染(Gitlin等， 为10～。因此病毒能够通过变异失去对RNAi的 2003)，但在生理条件下RNAi介导哺乳动物细胞中 敏感性，特别是RNA病毒，这种可能性更大，这就 抗病毒的作用机理仍不太清楚。最初人们认为在哺 成为应用RNAi技术打靶病毒基因的难点。应用 乳动物细胞中不存在有活性的RNA沉默机制 RNA干扰技术抑制病毒的研究虽然在体外试验中 (Fire，1999)，只存在由dsRNA(double—RNA)介导 取得很大进展，但由于各种类型的病毒在基本的生 的非特异性和干扰素介导的抗病毒反应，而此反应 物学特性和复制机制上有着很大的差异，这就提示