SMART技术构建衣藻细胞酵母双杂交文库.pdf

生物技术通报 ·研究报告· BIoTEcHNoLoGYBULLETlN 2011年薷9期 SMART技术构建衣藻细胞的酵母双杂交文库 孙银行潘俊敏 (清华大学生命科学学院细胞骨架与信号转导实验室．北京100084) 摘要：表藻是用皋研究植物先舍砟甩和动斩纤毛常用的模式生物。为了研完蛋白质之间的相互作用．利用sMART 技术构建了袁藻的酵母嫂杂交文库。使用T一功I试刺提取鞭毛再生过程和光周期培养的细胞进入分裂前的表藁细胞的总 TE一4∞柱子去除短片 募的cDNA；cDNA和线性化栽体pGADl7-Rec共转化酵母Y187抽建酵母甄杂交丈库。库客选列3．0x10‘cFu，重组率为 70％，插^片鞋平均长度为0．6kb。以上结果说明霞文库质量较好，能讳通过筛选文库得到与目的蛋白互相作用的蛋白质，为 寻找蛋白质的作用伴侣打下基础。 关键词：鞭毛再生细胞周期袁藻酵母厦杂交文库sMART技术 Co砸trIlctionofa of Ye躯t-Two-HybridLibrary SMART 硼跏哪咖肌册嬲彤跏砌砌豇耐th Technique Sun PaⅡJu啪i“ Yinh8ng (D‘一。k-k幻nB耐s神d‰md岫nh6，s舳l矿￡扣＆如嘣．乃如限咖u帕wl竹，B喇喈1∞∞4) A themodel Abstract：Ye蛆t山。一Hyb—d libm巧of o咿n口m ted‰mcelk 07 t0mit0Bh tD The 6呲$t咖d unde堵。咄n49eu盯椰锄blyP血r u5i”E％一眦g朋t．oli印t㈣u跎dpud母mRNA cDNA mRNA耐tll to double sMART LD·PcR舶8 w柚5ynIlIe自ized畸Teve眦廿蚰5c“p6蚰0ftechniql|e，蛐d pe面med8yntll邯ize 岫ndcDNA．sh耐ercDN^B舯坤euminakd 4CHROMAsPINTE-4∞c0J哪．Pu^6edcDN^眦dline盯veclor bymnni“gth坤ugIl oftIIe i53．Ox Io． (pG^DT7-Rec)∞·t啪sfo曲甜in幻yc叫t‘tr且in，Y187，ge“emti“gYean一1～o·Hyb耐libr羽了．仙e性pncilynbr8ry CFUwitlla删ombin砒ion甩kof70％蛐ddn ofin5c血0f0．6kb．ne挑坤亭ul协indic啦thⅡttIIe n‘啦5诧e hbm，iB眦hablefor ofinte陀5t． ·c啪llinsfo‘Pot即tialPanner(s)ofproIem8 Cendivid∞