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菌种的保存 1.临时保藏： 接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。 2.长期保存： 甘油冷冻管藏法 四、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 （二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。 （三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。 从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？ C、H、O、N、P、S ?五大营养物质 碳源 氮源 生长因子 水 无机盐 ?微生物化学元素组成： 思考1 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 思考2 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 问题讨论 需要使锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？ 思考3 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 思考4 在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 思考5 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 倒平板技术 1 2 3 4 ③ 用左手拇指 和食指将培养皿 打开一条稍大于 瓶口的缝隙，右 手将锥形瓶中的 培养基 ( 约 10~ 20mL) 倒入培养 皿，左手立即盖 上培养皿的皿盖。 倒平板技术 1 2 3 4 ④ 等待平板冷却凝固，大约需5~10min。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。 9．倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。 10．无菌检查： 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。 （二）纯化大肠杆菌 接种方法有： 平板划线法和稀释涂布平板法 微生物的接种技术： 平板划线的操作方法 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。 稀释涂布平板法 　　1.将分别盛有9mL水的6支试管灭菌，并按101~106的顺序编号。 2.用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第二支试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。 3.从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复第2步的操作。依次类推，直到完成最后一支试管的稀释。 注意： 移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰1~2cm处. 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 问题讨论 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。 问题讨论 微生物的恒温培养 微生物的恒温培养 微生物的恒温培养 2010年上学期 湖南长郡卫星远程学校 制作 05 微生物的实验室培养 特点：小 简 低 微生物 病毒 细菌 放线菌 真菌 原生动物 原核生物界 原生生物界 真菌界 病毒界 　　是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称