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1.2基因工程的基本操作程序 （3）花粉管通道法 2、将目的基因导入动物细胞 * * 原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 启动子：位于基因首端一段能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列。没有启动子，基因就不能转录。 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，它能阻碍RNA聚合酶的移动，并使其从DNA模板链上脱离下来，使转录终止。 RNA聚合酶:能够识别启动子上的结合位点并与其结合的一种蛋白质.(以模板转录然后脱落) ①不能转录为信使RNA，不能 编码蛋白质。 ：能转录相应的信使RNA，能 编码蛋白质 编码区 非编码区 原核细胞的 基因结构 ②有调控遗传信息表达的核 苷酸序列，在该序列中， 最重要的是位于编码区上 游的RNA聚合酶结合位点。 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 启动子 终止子 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 能够编码蛋白质的序列叫做外显子 不能够编码蛋白质的序列叫做内含子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 内含子： 外显子： 真核细胞的基因结构 真核细胞的 基因结构 编码区 非编码区 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 ：有调控作用的核苷酸序列， 包括位于编码区上游的RNA 聚合酶结合位点等。 非编码序列： 包括非编码区和内含子 都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的 相同点 编码区是间隔的、_____的 编码区是 _____的 不同点 真核细胞 原核细胞 原核细胞与真核细胞的基因结构比较 思考 编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？ 连续 不连续 编码区 非编码 分离出质粒并用限制酶进行切割 1.提取目的基因 2.目的基因与运载体结合 3.目的基因导入受体细胞 4.目的基因检测与表达 回忆：基因工程的基本操作步骤 一、目的基因的获取 (一)、目的基因主要是______________________ 编码蛋白质的基因 请举出三个以上的例子 （二）、获取目的基因的常用方法有哪些? 1、从基因文库中获取 2、利用PCR技术扩增 3、人工合成 一、目的基因的获取 1.从基因文库中直接获取 (1)基因文库： (2)基因文库的分类:按外源DNA片段的来源分类 种类 基因组DNA文库：含有一种生物的全部基因 部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因， 如：cDNA文库 (3)获取目的基因的根据： 提取某种生物的全部DNA 用适当的限制酶切 一定大小的DNA片段 将DNA片段与载体连接 导入受体菌中储存 基因组文库 (4)基因文库的构建方法 a.直接分离法(鸟枪法) 某种生物的单链mRNA 单链互补DNA 双链cDNA片段 导入受体菌中储存 与载体连接 cDNA文库 反（逆）转录酶 DNA聚合酶 b.反转录法：cDNA的合成流程图解 (4)基因文库的构建方法 基因组文库和部分基因组文库(cDNA文库)比较 (1)概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 (2)原理： DNA复制 2、利用PCR技术扩增目的基因 (3)条件：_______________________ 、 _______________、___________ 、 ___________.等 (4)方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数） (5)结果： 四种脱氧核苷酸 一对引物 DNA聚合酶 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 要有一段已知目的基因的核苷酸序列（前提条件） (6)过程 高温变性（解旋为单链） 低温退火（引物与单链互补结合） 适温延伸（在Taq酶的作用下合成 与模板互补的DNA双链） 重复循环 预变性（增加DNA变性的概率） (7)PCR技术扩增与DNA复制的比较 结果 酶 场所 解旋方式 不同点 条件 原料 原理 相同点 DNA复制 PCR技术 碱基互补配对 四种脱氧核苷酸 模板、能量、酶 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化 体外复制 细胞核内 热稳定的DNA聚合酶 细胞内的DNA聚合酶 大量的DNA片段 形成整个DNA分子 3.人工合成的目的基因 基因较小，序列已知 DNA合成仪 二、基因表达载体的构建—基因工程的核心 1、目的： 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同