细胞实验指导.doc

细胞生物学实验指导材料 （详见实验参考书） 生物绘图法 ----绘、标、注 合理布局 先绘草图绘图和文字一律用3H铅笔明暗和颜色深浅用不同密度圆点表示图注在右侧,平行线引出、马铃薯块茎涂片观察 ??在载玻片上滴一小滴水；刮取少量马铃薯块茎粉浆于水中；盖上盖玻片，吸去多余水分； 显微镜下观察。 、桔皮制片??溶生性分泌腔内分泌结构、红辣椒果肉细胞临时制片： 取一小方块红辣椒果皮，尽量多地割去果肉；然后放在载玻片上，果肉面朝上，用刀片尽量多地刮去果肉； 取最薄部分果皮，用水装片，吸去多余水分后；显微观察细胞和有色体，细胞壁、纹孔。 、藓叶片临时装片在干净载玻片上滴一滴水；取一片藓叶片于水中；盖上盖玻片，吸去多余水分后；显微镜下观察： 叶绿体 2.1 准备一块无色滤光片，为10倍物镜制作挡光板。首先进行调焦使物像清晰。取下显微镜的目镜观察，调节聚光器的可变光阑与10倍物镜正好匹配。然后取下聚光器，用圆规小心地量出可变光阑此时所开的孔径。 2.2 用剪刀作一个和光阑大小一样的圆形黑纸片，并贴在滤光片中央。在浆糊未干时立即放到托架上（黑纸片朝下），在没有目镜的情况下向镜筒中看，仔细调整黑纸片的位置，使它正好能挡掉整个视场的光而成为全暗的。四周不漏光。待浆糊干后即成为一块用于10倍物镜的中央挡光板。 2.3 用同样的做其他物镜相匹配的挡光板。 2.4 操作时应注意：1）聚光器的焦点对准被检物。2）黑纸片的大小和位置要适宜，对观察效果的影响很大。对于10倍物镜的黑纸片，直径允许稍大于可变光阑与物镜相匹配时所开启的口径；而40倍物镜则应力求黑纸片直径与光阑所开的口径相同大小。3）镜口率在0.85以下。4）若在聚光器上端透镜与载片之间放香柏油或液体石蜡后观察效果更好。5）照明光线要强。 3．暗视野的观察按普通显微镜的用法获清晰的像后，安装上与物镜相匹配的中心挡光板。调可变光阑到最大极限，以获得最大的照明。用同样的方法进行高倍镜观察。    中央遮光板实验报告： 1.写出自制暗视野显微镜的方法及步骤及使用暗视野显微镜的注意事项， 2. 绘制暗视野下观察到的原生动物图形。 实验3. 细胞计数 目的 学习、掌握细胞培养中最基本的细胞计数方法。 原理 应用显微镜的成像原理，并借助血细胞计数板，计算单位体积的细胞或微小生物的数量。 用品 材料：药品：0.17mol/L氯化钠溶液仪器：细胞计数板、吸管及胶头 步骤 酵母观察： 1．稀释：将酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如不浓，可不必稀释。 2．镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。 3．加样品：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴（不宜过多），使菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。静置5—10分钟即可计数。 4．显微镜计数:将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数。一般样品稀释度要求每小格内约有5—10个菌体为宜。若选用25×16规格的计数板则每个计数室选5个中方格，可选4个角和中央的中格（即80个小格），若选用16×25规格的计数板，则数四个角：左上、右上、左下、右下的四个中方格，（即100小格）中的菌体进行计数。位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作两个菌体计数。计数一个样品要从两个计数室中计得的值来计算样品的含菌量。 5．清洗血球计数板：使用完毕后，将血球计数板在水笼头上用水柱冲洗，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察每小格内是否有残留菌体或其化沉淀物。若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。 6、实验报告 1．将结果记录于下表中。A表示五个中方格中的总菌数；B表示菌液稀释倍数。 各中格中菌数 A B 菌数/ml 二室平均值 1 2 3 4 5 第一室 第二室 2．为什么用两种不同规格的计数板测同一样品时，其结果一样？ 注意事项 1、务必使细胞分散成单个细胞，取样计数前，应充分混匀细胞悬液。2、1-2分钟，待细胞下沉后，方可进行计数。3、20个以上，表示血细胞分布不均匀，必须重新计数。 目的 了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。 原理 当红细胞置于不同等渗溶液中时，由于对各种溶质的通透性不同，因此有的溶质分子可透入，有的溶质分子则不能透入，能透入的溶质分子的速度也不同。当溶质分子进入红细胞使细胞内溶