组织工程2015.ppt

构建组织的三个关键步骤 第一步 第二步 第三步 必要性 扩增细胞 , 达 足够数量 诱导分化 维持分化表型 , 形成具有特定 形态功能组织 方法 常规培养瓶 ( 皿 ) 培养方法 优化设计三 维骨架结构 和表面性质 采用灌注培养 系统提供稳定 的环境条件 组织工程皮肤 人造生物皮肤是世界上第一种获得FDA批准的组织工程产品，在治疗大面积皮肤缺损患者、顽固性溃疡患者和严重烧伤患者取得了较好的疗效，并以进入商品化。 组织工程皮肤是应用组织工程学的基本原理，将体外培养的高浓度表皮和真皮细胞，扩增后吸附于一种生物相容性良好并可被人体逐步吸收的细胞外基质上，对其进行构建和移植，从而可实现创伤的修复和重建。 在对烧伤治疗中可减少对供体组织的需求，减少伤口的接疤和收缩现象； 对大面积急性伤口可实现快速覆盖； 可以作为传递外界生长因子的载体。 组织工程皮肤技术的优点： 组织工程皮肤分类 表皮替代物 自体/同种异体表皮细胞移植膜片 培养时间长、膜片挛缩、不稳定、自发形成水疱、结构不完整、外观缺陷、手术操作难 真皮替代物 Integra artificial skin, Allodem, Biobrane, Dermagraft-TM, Dermagraft-TC 复合皮肤替代物 理想的创面覆盖物应为包含自体表皮与真皮的复合移植物，从而达 到永久性修复创面的目的。目前最成熟的人工皮肤是Apligraft。它是一种包含异体上皮细胞和成纤维细胞的双层组织工程皮肤。 壳聚糖-明胶人工皮肤，明胶-海藻酸纳海绵体，双层明胶以及胶原等天然材料为支架的人工复合皮肤 人工皮肤的应用 目前，可获得的人工皮肤已广泛应用于临床及基础医学领域： 作为大面积皮肤缺损患者创面覆盖； 用于药物毒性及安全性检测，作为药物渗透试验的体外模型； 用于细胞间动力学及相互作用的研究，提供皮肤生物研究的模型，用于创面修复、黑素调整机制、皮肤病发病机制的研究。 蚕丝人造皮肤 主要发明人：浙江大学动物科学学院副教授闵思佳 　由科研人员提取蚕丝中的蛋白质生产而成，这种人造皮肤就像用蚕丝做成的服装面料一样，具有丝绸般的光滑平整和柔韧特性。而且，与目前治疗大面积损伤时最常用的猪皮材料相比，它安全性更高。 与其他干细胞制作人工皮肤相比，丝蛋白不会轻易遭到人体排斥； 丝蛋白通过技术手段制作的支架结构可以逐步在人体内降解； 根据测算，要想制作巴掌大的一块仿生人工皮肤，所需要的丝蛋白不过在5克左右，差不多18个蚕茧就能解决问题。 优点 英国 ：ICX-SKN的人造皮肤 研制者：从事细胞疗法研究的Intercytex集团 　名为ICX-SKN的人造皮肤，这种皮肤在28天后可完全与人体结合，封闭并愈合伤口。 在初步的临床实验中，由于质地逼真，耐久性好，人造皮肤移植取得突破性成功。 白鼠体上移植的人造皮肤 研制者：第四军医大学的研究人员 从新生或出生前的试验鼠身上取出少量皮肤组织，采用灭菌、消化、分离、培养等手段，获得了足够的细胞数量后，再用组织工程的办法将其重新组合，成功地研制出具有表皮组织和结缔组织的皮肤。这个过程用一个形象的比喻就是在器皿中“种皮肤”。试验人员将这些人造皮肤移植到白鼠身上，经过观察发现，人造皮肤不仅具有正常皮肤的部分功能，而且具有良好的修复皮肤创伤的作用，到目前为止并未发现有免疫排斥反应。可以说，目前人造“鼠皮”已研制成功。当然，这种皮肤与真正的皮肤还有差距，比如说没有汗腺和毛发等附属物。 我国第一个“人造皮肤”正式进入临床应用 四军医大口腔医院研制的我国组织工程第一个产品实现产业化 这项技术的先进性在于，国内目前的人造皮肤研究仅能进行表皮的复制，四军医大则发展出带有结缔组织第二层的皮肤，这种技术目前在国际上只有美国掌握，在国内四军医大是第一家。 金岩教授展示 组织工程皮肤 俄罗斯以纳米材料制人造皮肤 俄罗斯的生物皮肤和外国的类似产品性质不同。它具有高度的相容性，疗效好。特点是用它进行的包扎无需更换。此外，它有再生的性能，在它上面能繁殖移殖的细胞。还有，俄罗斯的生物皮肤较便宜，这也很重要。 细胞传代方法 根据细胞生长的恃点，传代方法有3种： 悬浮生长细胞传代 离心法传代：离心（1000转/分）去上清，沉淀物加新培养液后再混匀传代。 直接传代法：悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除l/2—2/3，然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。 半悬浮生长细胞传代（Hela细胞） 此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接吹 打法使纫胞从瓶壁脱落下来，进行传代。 贴壁生长细胞传代 采用酶消化法传代。常用的消化液有0.25％的胰蛋白酶液。 细胞冻存和复苏 细胞低温冷冻贮存是细胞室的常规工