2008PMWS患病猪和健康猪感染的PCV2序列比较分析.PDF

维普资讯 350 中国兽 医学报 2008年4月 第28卷 第4期 Chn／．， Aor．2008 Vo1．28No．4 PMWS患病猪和健康猪感染的PCV2序列比较分析 赵浩军’，范伟兴 ，姜 平 ，李晓成 ，黄保续 (1．南京农业大学动物医学院，江苏南京210095；2．农业部动物 检疫所，山东 青岛266032) 摘要：根据GenBank中已发表 PCV2全基因序列，设计 1对特异性引物，建立扩增PCV2全基因的PCR方法。用该方 法从山东、河北、安徽、甘肃4个省份的4份PMWS患病猪的阳性病料和山东德州、南京、北京、甘肃、甘肃泉州和白 银5个屠宰场的7份健康猪阳性样品中直接扩增出11个PCV2全基因片段。将扩增片段克隆于pMD18．T载体．并 通过双酶切的方法筛选获得 了11个阳性重组质粒，分别命名为 SDPCV、HBPCV、AHPCV、GSPCV、DZPCV1、DZPCV2、 DZPCV3、NJPCV、BJPCV、BYPCV和 V。测序结果分析表明，除了BJPCV和GSPCV2株PCW2基 因组全长为 1768 bp外，其余 9株基因组全长均为 1767bv。应用DNAstar序列分析软件，对测定的 l1个PCV2序列与GenBank中登 录的lO个不同地区的代表毒株进行同源性比较，发现健康猪群感染毒株的全基因组序列和ORF2及其氨基酸序列 同源性比患病猪群略高，ORF1、ORF3及其相应氨基酸序列同源性在2类猪群 中则没有明显差异。系统发生进化树 显示，DZPCV3与其他 lO株PCV2亲缘关系较远，但与山东分离株AY556473亲缘关系接近，共同构成一个独立分支： 其余 lO株 PCV2之间关系密切，都分布于一个独立的小分支中，并与法国分离株亲缘关系接近。患病猪群和健康 猪群感染的PCV2在基因进化树上交错分布，表明2类猪群感染的PCV2在基因水平上差异不显著，在地域分布上 也没有 明显差异。 关键词：PMWS患病猪；健康猪；猪圆环病毒2型；序列分析 中图分类号：S852．65；Q78 文献标识码：A 文章编号：1005-4545(2008)04-0350-04 AnalysisofcompletegenomesofPCV2inpigs、thand~thom PMW S ZHAOHao．jun’，FANWei．xin2，JIANGPing ，LIXiao-cheng2，HUANGBao-xu2 (1．CollegeofVeterinary Medicine，NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing210095，Ch／na；2．NationalAnimalQuarantineInstitute， MinistryofAgriculture，Qir~ao，Shangdong266032，Chn／a) Ab act：Accordingtothepul1lisl1edgenomicsequencesofPCV2，apairofspecificp lerswasdesignedtoamplifythecoin- pletegenon,AofPCV2．WiththisPCR assay，fourPCV2completegenefragmentswereamplifiedfrom pigswithPMWS，andseven wereamplifide from htetissuesofhealhtypigs．ThefiagmentswereclonedintopMD18-Tvectorandelevenrceombinantplasmids wereobrained，andnamedsDPCv，邶 PCV，A}Ⅱ】cV，GSPCV，DZPCV1，DZPCV2，DZPCV3，NJPCV，BJPC~，B ，Q V，re- spcefivcev．ThenhtecompletegenomesofPCV2isolatesweredetermined．Theresultsshowde thatthegenomesof BJPCV and GSPCW isolates were1768bpinle,cth．andhteohterswere1767bp．Theel