SigBQ225P突变促进金黄色葡萄球菌生物被膜-第三军医大学学报.PDF

　ｈｔｔｐ：／／ａａｍｍｔ．ｔｍｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ　　 　　　　　　第三军医大学学报，２０１７，３９（８） ７１１ ＤＯＩ：１０．１６０１６／ｊ．１０００５４０４．２０１６１００７７ ＳｉｇＢ（Ｑ２２５Ｐ）突变促进金黄色葡萄球菌生物被膜形成 １ １ １ ２ １ ２ １ 刘　慧 ，尚伟龙 ，彭华刚 ，周　坤 ，胡　珍 ，周人杰 ，饶贤才 　　（４０００３８重庆，第三军医大学基础医学部 １ ２ 微生物学教研室，重庆市微生物工程实验室 ；４３００３７重庆，第三军医大学新桥医院急救部 ） 　　［摘要］　目的　探讨金黄色葡萄球菌ＳｉｇＢ（Ｑ２２５Ｐ）突变对其生物被膜形成能力的影响。方法　比较 临床分离金葡菌（ＸＱ株）与实验室传代获得菌落颜色变白之ＸＱＷ株的生物学特性，通过结晶紫染色法 以及激光共聚焦检测菌株的生物被膜形成。进行ＸＱ及ＸＱＷ全基因组测序，比较相关基因，寻找突变 位点。分别扩增ｓｉｇＢ（Ｑ２２５Ｐ）基因及其上游片段，经酶切后连接穿梭载体ｐＢＴ２，构建同源重组质粒 ｐＢＴ２ｓｉｇＢ（Ｑ２２５Ｐ），电转化至金葡菌 ＲＮ４２２０，再将经 ＲＮ４２２０修饰后的质粒电转入 Ｎｅｗｍａｎ。利用 ｐＢＴ２质粒对温度敏感的特点筛选 ＮｅｗｍａｎｓｉｇＢ（Ｑ２２５Ｐ）。利用同样的方法构建 ｓｉｇＢ敲除菌株 ＮｅｗｍａｎｓｉｇＢ，并构建回补菌株Ｎｅｗｍａｎ ｓｉｇＢ／ｓｉｇＢ以及ＮｅｗｍａｎｓｉｇＢ／ｓｉｇＢ（Ｑ２２５Ｐ）。比较这些菌 △ △ △ 株的生物被膜形成差异。结果　ＸＱＷ株在液体培养基中呈絮状生长，结晶紫法以及激光共聚焦检测结 果显示其生物被膜形成能力显著强于野生株，全基因组测序和比较发现 ＸＱＷ 的ｓｉｇＢ基因发生 （Ｑ２２５Ｐ）突变。构建的同源重组质粒ｐＢＴ２ｓｉｇＢ（Ｑ２２５Ｐ）及ｐＢＴ２ｓｉｇＢ转化金葡菌Ｎｅｗｍａｎ后，经筛 △ 选，获得ＮｅｗｍａｎｓｉｇＢ（Ｑ２２５Ｐ）及ＮｅｗｍａｎｓｉｇＢ菌株；回补质粒ｐＬＩ５０ｓｉｇＢ及ｐＬＩ５０ｓｉｇＢ（Ｑ２２５Ｐ）转 △ 化ＮｅｗｍａｎｓｉｇＢ，筛选获得回补菌株ＮｅｗｍａｎｓｉｇＢ／ｓｉｇＢ及ＮｅｗｍａｎｓｉｇＢ／ｓｉｇＢ（Ｑ２２５Ｐ）。经过结晶 △ △ △ 紫染色法及激光共聚焦测定生物被膜，发现ＮｅｗｍａｎｓｉｇＢ（Ｑ２２５Ｐ）较野生株的生物被膜形成能力显著升 高，与ＸＱＷ的生物被膜形成能力强于ＸＱ野生型的表型相一致；ＮｅｗｍａｎｓｉｇＢ／ｓｉｇＢ（Ｑ２２５Ｐ）的生物被 △ 膜形成能力明显高于ＮｅｗｍａｎｓｉｇＢ／ｓｉｇＢ。结论　ＳｉｇＢ（Ｑ２２５Ｐ）具有促进金葡菌生物被膜形成的能力。 △ 　　［关键词］　金黄色葡萄球菌；生物被膜；同源重组；ｓｉｇＢ 　　［中图法分类号］　Ｒ３７２；Ｒ３７８．１１；Ｒ３９４．３　 ［文献标志码］　Ａ ＳｉｇＢ（Ｑ２２５Ｐ）ｍｕｔａｔｉｏｎｐｒｏｍｏｔｅｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓｂｉｏｆｉｌｍ １ １ １ ２ １ ２ １ １ ＬｉｕＨｕｉ，ＳｈａｎｇＷｅｉｌｏｎｇ，ＰｅｎｇＨｕａｇａｎｇ，ＺｈｏｕＫｕｎ，ＨｕＺｈｅｎ，ＺｈｏｕＲｅｎｊｉｅ，ＲａｏＸｉａｎｃａｉ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃ