TRAP结合液体闪烁计数法半定量检测端粒酶活性-癌变·畸变·突变.PDF

癌变·畸变·突变　　1999 年第 11 卷第 5 期　　　　　　　　　　　　　　Carcinogenesis Teratogenesis and Mutagenesis Vol 11 No 5 1999 TRAP 结合液体闪烁计数法半定量检测端粒酶活性① 1 1 2 吴成秋 　陈 　雯 　张 　桥 　万德森 1 2 中山医科大学公共卫生学院卫生毒理学教研室 　肿瘤医院腹外科 　广州 　510089 3 摘要 　本文介绍一种端粒酶检测方法 ,该方法是将 TRAP 法在 PCR 过程中引入 HdCTP ,结合液闪计数 cpm 半定量分析端 粒酶活性。应用该方法检测端粒酶阳性的 CN E 细胞和部分组织标本及 RNase A 或加热预处理后的对照标本 ,并与 TRAP 法 2 相比较 ,结果显示 CN E 细胞端粒酶阳性 ,10 个 CN E 细胞中仍可检到端粒酶 ,组织样品的端粒酶与文献值基本一致 ;放射性 2 2 ( ) 活性计数 cpm 与 CN E 细胞抽提液中端粒酶活性具有良好的线性关系 ;用 RNase A 或加热处理后标本为阴性 ,cpm 值接近阴 2 ( ) 性对照 ;批内和批间变异度分别为 11. 68 %和 20 99 % 。该方法不需使用聚丙烯酰胺凝胶电泳 PA GE 和放射自显影 ,简便快 速 ,当天可观察结果 ,并具有灵敏度高、特异性和批内重复性好之特点。 端粒酶 ;定量分析 ;端粒重复序列扩增法 ;液体闪烁计数 关键词 　 QUANTITATIVE DETECTION OF TELOMERASE ACTIVITY BY COMBINA TION OF TRAP METHOD AND SCINTILLATION COUNT ASSAY Wu Chengqiu , Chen Wen , Zhang Qiao , et al 1 Depart ment of Health Toxicology , School of Public Health , S un Yatsen U niversity of Medical Sciences , 2 Guang Zhou 　510089 , Depart ment of Hy giene , Hen g Yang Medical College , Hen g Yang , Hu N an 　 421001 Abstract 　This study developed a semiquantitative method of telomerase activity. The method was based on the combination of TRAP assay and scintillation count assay (3 HdCTP incorporation ) . It was used to quantify telomerase activity in CN E2 cells and some tissue specimens. RNasepretreated or h