体外培养人成骨细胞骨相关基因表达.PDF

中国骨质疏松杂志 2002年 8月第 8卷第 3期 ChinJOsteoporos，August2002，Vol8，No．3 · 论 著 · 体外培养人成骨细胞骨相关基 因表达 于 明香 金慰芳 顾淑珠 王洪复 【摘要】 目的 探讨体外培养人成骨细胞骨相关基因表达情况 。方法 应用组织块移行生 长 法分离培养人成骨细胞 ，活体观察与碱性磷酸酶染色观察其生物学特性 ，采用 RT．PCR方法检测培 养 14d的二代人成骨细胞基 因 COI1，BGP，OPG，ON，IGF-1，TGF-31的表达情 况 ，并用 GAPDH予 以矫 正 ：结果 相差倒置 显微镜观察可见细胞呈三角形 、四角形或不规则形 ，50％ ～90％的细胞碱性磷 酸酶呈 阳性 ，培养 14d的二代人成骨细胞检测到基 因 COI1，BGP，OPG，ON，IGF-l，TGF-13的 mRNA表 达 =结论 体外培养人成骨细胞可表达 COI1，BGP，OPG，ON，IGF．1，TGF-13等骨相关基 闫【。 【关键词】 人成骨细胞 ； 体外培养； 基因表达 Bone-relatedgeneexpressioninosteoblastsculturedinPitTo YUMingxiang，JINWe和ng，GUShuzhu，eta1． DepartmentofBo， Metabolism，InstituteofRadiationMedicine，FudanUniversity，Shanghai 200032，China 【Abstract】 Objective Toinvestigatethebone-relatedgeneexpressioninhumanosteoblastsculturedin vitro．M ethods Human osteoblastswere isolated and cultured by the method of tissue—fragmentmigrating growth．Theirbiologicalcharacteristicswere observed alivewith alkaline phosphatase staining．BV themethod of RT．PCR．thehumanosteoblastsofsecondpassageculturedfor14dayswereexaminedfortheexpressionofgenes COLl，BGP，OPG，ON，lGF．1，andTGF—GmRNA．Theirexpressionwasnormalized relativetotheirhousekeeping gene．productsGAPDH bytheestablishmentofagene／GAPDH ratio．Results Phasecontrastinvertedmicroscopy showshtatthe osteoblastsaretriangle．quadrangleorirregularinshape．50％ 一90％ ofosteoblastsshow positive alkalinephosphatase．ThegenesCOIl，BGP，OPG，ON，IGF．1，andTGF-GmRNA expressionwasobservedinthe human osteoblastsofsecondpassageculturedfor14 days．Conclusion Human osteoblastscultured in vitro can expressCOL1，BGP，0PG，0N，IGF．1andTGF—GIllRNA． 【Keywords】 Humanosteoblasts； Cultureinvitro； Geneexpression 成骨 细胞 骨形成功能减退是老年性 骨质疏松症 仿与异戊醇 (中国医药上海化学试剂 公 司)，RNA 的重要发病环节之一 ，然而有关增龄性成骨细胞骨 PCR试剂盒与琼脂糖凝胶 (Takara，Japan)。80em 形成功能减退 的机理到 目前为止 尚不完全清楚 …。 与25crn2培养瓶 (Nunclon，Denmark)，中3．5em 培养 人成骨细胞体外培养是离体研究