人ll-37与干扰素α2a密码子的优化及其在毕赤酵母中-生物技术通报.pdfVIP

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2017-11-04 发布于天津
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人ll-37与干扰素α2a密码子的优化及其在毕赤酵母中-生物技术通报.pdf

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人ll-37与干扰素α2a密码子的优化及其在毕赤酵母中-生物技术通报

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第期 2014 11 人 LL-37 与干扰素 α2a密码子的优化及其在毕赤酵母中的融合表达张明杰（广东紫金正天药业有限公司，河源 517000）摘要：通过密码子优化，在毕赤酵母中高效表达人LL-37 与IFN-α2a 融合蛋白。先按P. pastoris 密码子偏好性对LL-37 与IFN-α2a 的原始密码子进行了改造，并在二者之间加上GlyGlyGlyGlySer 的柔性连接接头，人工合成设计的新序列，最后通过pPIC9K 载体将其整合入P. pastoris GS115 的基因组，构建出重组菌株GS115LI。利用遗传霉素浓度梯度筛选出两株高拷贝的 GS115LI1 和GS115LI2 菌株。对这两株菌经发酵诱导后的发酵液进行SDS检测、抗病毒活性检测和抗菌活性检测，证明重组株既能够成功表达出LL-37 与IFN-α2a 的融合蛋白，而且该融合蛋白成功保留了抗菌肽与干扰素的功能活性。诱导发酵后，融合蛋白的产量可达到819.1 mg/L，经盐析、疏水层析和离子交换层析分离，可得到纯度达97% 的融合蛋白产物，回收率可达到 46.2%，纯化后产品的效价可达2.6×108 IU/mg。经过密码子优化后，成功实现在毕赤酵母中高效表达出既有LL-37 抗菌活性又具有干扰素α2a 活性的融合蛋白。关键词：干扰素α2a LL-37 融合表达 - -α The Codon Optimization and Fused Expression of LL 37 and IFN 2a in Pichia pastoris GS115 Zhang Mingjie （，，Heyuan 517000 ） Pharmaceutical Co. Ltd. Guangdong Zijing Zhengtian Abstract: To express the fussed protein of human LL-37 and IFN-α2a in Pichia pastoris with codon optimization. Recording to the codon preference of P. pastoris, the codons of LL-37 and IFN-α2a were optimized. A flexible linker of GlyGlyGlyGlySer was placed between LL-37 and IFN-α2a. The newly scheming DNA sequence was synthesized chemically. P. pastoris GS115LI was constructed by integrating the new gene into GS115