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人smyd3基因启动子荧光素酶报告载体的构建与分析-中国药科大学
学 报
JournalofChinaPharmaceuticalUniversity 2009,40(2):173-177 173
人SMYD3基因启动子荧光素酶报告载体的构建与分析
谢景航,邹佳宁,唐 聪,杨家森,罗学刚,奚 涛
(中国药科大学生命科学与技术学院,南京210009)
摘 要 目的:克隆5′长度不同的SMYD3基因启动子序列并进行活性鉴定。方法:采用PCR方法克隆出SMYD3基因
转录起始位点上游不同长度的基因片段,构建T载体并利用酶切与测序进行鉴定;将该基因亚克隆至pGL3Basic荧光报告
基因载体上;瞬时转染Hep3B细胞后用双荧光报告检测系统检测不同片段的荧光活性。结果:T载体酶切与测序结果正
确,成功构建了pGL3Basic+370~1400bp荧光报告载体并利用双荧光素酶报告基因检测系统分析了重组质粒的荧光活
性。结论:pGL3Basic+370~1400bp重组质粒转染组与阳性对照组相比并未表现出显著的荧光活性,本研究认为SMYD3
基因的启动子核心区域位于-1334bp的上游。
关键词 SMYD3;荧光素酶;报告载体;启动子
中图分类号 R7357 文献标识码 A 文章编号 1000-5048(2009)02-0173-05
ConstructionandanalysisoftheluciferasereportervectorsofhumanSMYD3
genepromoter
XIEJinghang牞ZOUJianing牞TANGCong牞YANGJiasen牞LUOXuegang牞XITao
SchoolofLifeScienceandTechnology牞ChinaPharmaceuticalUniversity牞Nanjing210009牞China
Abstract Aim牶Tocloneandanalyzethe5′regionofhumanSMYD3genepromoterMethods牶Differentfrag
mentsoftheSMYD3promoterwereclonedandinsertedintoPTG19Tvectorsandthenanalyzedbyenzymedi
gestionandsequencedetectingThecorrectsequenceswerelaterinsertedintopGL3Basicluciferasereportervec
torsTransienttransfectionoftheplasmidsandβgalactosidasewascarriedoutsimultaneouslywithHep3Bcell
lineDuallightreporterassaywasusedtodetecttheluciferaseactivitiesResults牶Theenzymedigestingandse
quencedetectingoftherecombinantPTG19TvectorswereprovedtobecorrectThepGL3Basic+3701400bp
luciferasereportervectorsweresuccessfullyconstructedbytheduallightsystemassayConclusion牶ThepGL3
Basic+3701400bptransfectedgroupshavenosignificantluciferaseactivitiesItisspeculatedthatthepotential
coreregionoftheSMYD3promotershouldlocateontheupstreamof-1334bp.
Keywords SMYD3牷luciferase牷reportervector牷promoter
ThisstudywassupportedbytheNationalBasicResearchProgramofChina牗973Program牘牗NoG199805119牘
人SET和MYND结构域含有蛋白3(SETand 细胞的分化、黏附以及迁移[4-5]。采用小发夹干扰
MYNDdomaincontainin
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