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人白细胞介素10受体α基因真核表达及与jak1蛋白的-生物技术通报
生物技术通报
·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( )
2017, 33 5 :170-175
人白细胞介素 10受体 α基因真核表达及与 JAK1蛋白
的相互作用的检测
郭欣欣 王刚 邓巧亭 吴涵韬 李坤 吴英松 刘天才
(南方医科大学检验与生物技术学院抗体工程研究所,广州 510515)
摘 要 : 构建含人白介素10 受体α ( - )基因的真核表达质粒pENTER-IL-10RA-His,并在HEK293 中进行真核表达,
IL 10RA
并用免疫共沉淀检测JAK1 与IL10RA 在细胞内的相互作用。在HeLa 细胞中提取人总RNA,通过RT-PCR 获得人IL10RA 的基因全
长,并将其克隆至真核表达载体pENTER-His 中。经PCR 扩增、双酶切、测序鉴定后,将重组质粒pENTER-IL-10RA-His 转染至
HEK293 细胞中。免疫印迹法检测IL-10RA 蛋白在HEK293 细胞中的表达。结果显示,经PCR 扩增和双酶切,测序鉴定质粒克隆正确。
免疫印迹可见63 kD 的目的蛋白。共同转染JAK1 和IL-10RA 的质粒,免疫印迹可见分别为133 kD 和63 kD 的目的条带,免疫共
沉淀鉴定了JAK1 和IL-10RA 的相互作用。 - 基因成功构建在pENTER-His 中,并在HEK293 细胞中成功表达,并成功共转
IL 10RA
染JAK1 和IL-10RA 质粒,免疫共沉淀检测两者的相互作用。这为JAK1 和IL-10RA 相互作用的机制研究奠定基础。
关键词 : 白介素10 受体α (IL-10RA);真核表达 ;免疫共沉淀 ;蛋白相互作用
DOI :10.13560/ki.biotech.bull.1985.2016-0985
Eukaryotic Expression of Human Interleukin 10 Receptor α and
Detection of Interactions in Protein JAK1s
GUO Xin-xin WANG Gang DENG Qiao-ting WU Han-tao LI Kun WU Ying-song LIU Tian-cai
(Institute of Antibody Engineering ,School of Laboratory Medicine and Biotechnology ,Southern Medical University ,Guangzhou 510515 )
Abstract: This work is to construct a eukaryotic express vector pENTER-IL-10RA-His that expresses human interleukin 10 receptor α
(IL-10RA)in HEK293 cells,and then to detect the intracellular interaction between JAK1 and IL-10RA by co-immunoprecipitation. Human
total RNA was extracted from Hela cells,then - gene was amplified by RT-PCR and inserted into eukaryotic vect
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