六味地黄丸方对秀丽隐杆线虫寿命及daf-2mrna-世界科学技术-中.pdfVIP

2015　第十七卷　第一期　★Vol.17 No.1 六味地黄丸方对秀丽隐杆线虫寿命及 daf-2 mRNA、daf-16 mRNA 表达的影响＊ 许 湘，许 巧，郭 岚，王 平＊＊ 　 　 　 　 （湖北中医药大学老年医学研究所　武汉　430065） 目的：观察六味地黄丸方对秀丽隐杆线虫寿命、生殖力、运动能力的影响并探讨其可能的分子 摘　要 ： 机制。方法：秀丽隐杆线虫分为空白对照组、六味地黄丸方高、中、低剂量组（160、80、40 mg mL-1 ）。寿命 · 实验观察各组线虫平均寿命；生殖能力测试中，计数各组总子代数目；运动能力实验测试各组线虫20 s 内 身体弯曲的次数。实时荧光定量PCR （Real-Time PCR ）方法检测空白组和六味地黄丸方中剂量组的daf- 2 mRNA 、daf-16 mRNA 表达变化。结果：与空白组比较，六味地黄丸方中、低剂量组均能延长线虫的平均 P 寿命（ 0.01 ），以中剂量组更为显著，并可明显提高线虫生殖高峰期及末期的生殖能力。与空白组比较， P P 各剂量组均使线虫运动能力明显减缓（ 0.01 ）；用药组daf-2 mRNA 表达明显下调（ 0.05 ）；daf-16 P mRNA 表达明显上调（ 0.05 ）。结论：六味地黄丸方能明显延长秀丽隐杆线虫寿命，其机制可能与下调 daf-2 基因和上调daf-16 基因表达有关。 关键词 ：六味地黄丸方　秀丽隐杆线虫　寿命　daf-2　daf-16 doi ：10.11842/wst.2015.01.012　　中图分类号：R285　　文献标识码：A　 六味地黄丸方是中医“滋阴补肾”的经典名方， OP50购自美国线虫中心（Caenorhabditis…Genetics… 由熟地黄、山药、山茱萸、泽泻、茯苓、牡丹皮组成， Center，CGC）。 临床用于治疗因肾阴不足、虚火上炎所致的头晕耳 1.2　药物和试剂 鸣、腰膝酸软等症。现代研究证实，该方有改善肾 根据六味地黄丸经典方组成及用量配制中药 功能、抗衰老、增强免疫、促进新陈代谢等多种功… 免煎颗粒（江阴天江药业有限公司）购自于湖北中 [1-3] 能 。它在延缓衰老或治疗与年龄有关的疾病中 医药大学国医堂；琼脂粉（美国Sigma公司）；酵母 有一定疗效，而对其研究的方法主要是体外实验或 粉、胰蛋白胨（OXOID公司）；Trizol（Invitrogen公 生理指标的检测。为了研究其在整体水平上对机体 司），15596-026逆转录试剂盒（Thermo公司，批 TM 的影响，本实验选用模式生物秀丽隐杆线虫为实验 号：PR6901）；SYBR…Premix…Ex…Taq （TaKaRa 公 对象，观察六味地黄丸方对其寿命等衰老指标的影 司，批号：RR420A）；其它试剂均为国产。引物由 响，并探讨可能的分子机制。 英潍捷基（上海）贸易有限公司合成并进行质量… 检测。 1　材料与方法 1.3　主要仪器 1.1　菌株、线虫 超净工作台（新加坡ESCO公司），体视显微镜 野生型秀丽隐杆线虫（N2）及菌株E. coli… （上海科学器材有限公司），高压灭菌锅（上海申安医