变异链球菌ldh基因启动子的克隆及活性检测.pdfVIP

中国人兽共 患病学报 224 ChineseJournalofZoonoses 2016，32 (3) DOI：10．3969／j．issn1002—2694201603003 变异链球菌 ldh基因启动子的克隆及活性检测 张加勤 ，黄珊珊 。，徐巧丽 ，饶慧华 ，马晓波 ，黄朝阳 ，房丽丽 ，郑港森 ，宋秀宇。 摘 要 ：目的 克隆变异链球菌 ldh基 因启动子，并验证其活性。方法 以变异链球菌 UA159基 因组为模版 ，PCR扩增 变异链球菌 ldh基因候选启动子，将其插入 葡萄糖醛酸酶 (glucuronidase，gusA)报告基 因表达载体 pIB107BamH I／X^0I 之间，构建 ldh基 因启动子gusA 报告载体 pCKS11，PCR、酶切及测序鉴定；经 ScaI酶线性化后转化变异链球菌UA159，卡那 霉素筛选 阳性克隆SCKSll，经 PCR和测序鉴定后，检测其 GusA活性 。结果 成功扩增 出大小为 269bp的 ldh基 因候选启 动子 ；经PCR、酶切及测序鉴定，变异链球菌 ldh基 因候选启动子gusA 报告基 因表达载体 pCKSI1构建正确 ；PCR和测序鉴 定 ，ldh基 因候选启动子gusA报告株 SCKS11构建成功 ；变异链球菌 ldh基 因候选启动子启动的 GusA 活性是无启动子 的阴 性对 照的6．8倍 ，是 阳性对 照变异链球菌 clpP基 因启动子的0．9倍 。结论 成功克隆变异链球菌 ldh基因启动子序列 ，具有 较强的启动转录活性，为研 究ldh基 因的表达调控机制奠定基础 。 关键词 ：变异链球菌 ；ldh基 因；启动子 中图分类号：R378．1 文献标识码 ：A 文章编号：1002—2694(2O16)03—0224—05 Activitydetection ofIdh genepromoterofS rep Ococc mutans ZHANG Jia—qin ，HUANG Shan—shan ，XU Qiao—li，RAO Hui—hua， MA Xiao—bo ，HUANG Chao—yang ，FANG Li—li，ZHENG Gang—sen ，SONG Xiu～yu。 (1．DepartmentofClinicalLaboratory，theFirstAffiliatedHospitalofXiamenUniversity，Xiamen361003，China； 2．TheFirstClinicalMedicalCollegeofFujianMedicalUniversity，Fuzhou350108，China； 3．XiamenCentralBlood ServiceStation，Xiamen361003，China) Abstract：W eclonedtheldhgenepromoterofStreptococcusmutansandexploredit8activity．Thecandidatepromoterof S． utansldhgenewasamplifiedfrom S．mutansUA159chromosomeDNA byPCR。thenwasinsertedintopIB107byBamH I／XhoItoconstructBglucuronidasereportplasmidspCKS11．TheplasmidspCKS11wereverifiedbyPCR，restrictionenzyme andsequencing．AfterbeinglinearizedbySca I，theplasmidspCKS11weretransformedintoS．mutansUA159．Then，the strainwasscreenedoutbyTHYagarcontain300ug／mLkanamycin．AfterbeingconfirmedbyPCRandsequencing。theGusA activityofhomologousrecombination 8一glucuronidase reportstrainSCKS11and itparentalstrainsweremeasured．Re