发酵过程控制染菌的防治.PPT

/jpkc/fjgc * * 洁净室小流量在线监测系统 手套检漏仪 取样点 最少平板数 百级 2到3个 14 万级 2 2 十万级 2 2 三十万级 2 2 无菌平板检测 /jpkc/fjgc 2、种子及发酵液无菌状况检测 酚红肉汤培养基检测 平板划线 显微镜观察 发酵过程控制 染菌的防治 /jpkc/fjgc 四、染菌情况分析 染菌的原因有多种，对于实际情况如何分析呢？ 1、单罐染菌 不是系统问题，而是该罐本身的问题。如种子带菌、培养基灭菌不彻底、罐有渗漏、分过滤器失效 发酵过程控制 染菌的防治 /jpkc/fjgc 2、多罐染菌 系统问题，如空气过滤系统有问题，特别是总过滤器长期没有检查，可能受潮失效；移种或补料的分配站有渗漏或灭菌不彻底 3、前期染菌 种子带菌、培养基灭菌不彻底 发酵过程控制 染菌的防治 /jpkc/fjgc 4、中后期染菌 补料的料液灭菌不彻底或补料管道、阀门渗漏，一般不会是种子问题 发酵过程控制 染菌的防治 /jpkc/fjgc 五、染菌的防止 1、防止种子带菌 制备种子时对沙土管及摇瓶严格加以控制。 沙土制备时要多次间歇灭菌 注意接种时的无菌操作 子瓶、母瓶的移种和培养 无菌室和摇床间都要保持清洁。无菌室内要供给恒温恒湿的无菌空气，还要装紫外灯用以灭菌，或用化学药品灭菌。 发酵过程控制 染菌的防治 /jpkc/fjgc 无菌室要求 在无菌室中装有紫外灯，打开紫外灯，照半小时，关灯后15分钟再接种。 用消毒药水如新洁而灭配成1/1000浓度擦桌子、拖地，开启超净台的通风， 接种时必须在超净台上操作，超净台装有一台鼓风机，进风口有一粗过滤器，出风口有高效过滤器，保证无菌风从超净台吹出，外界有菌空气不可能进入接种区域，保证无菌条件。 接种人员必须穿好无菌服，戴好口罩，手用酒精棉球擦干净。 发酵过程控制 染菌的防治 /jpkc/fjgc 发酵过程控制 染菌的防治 /jpkc/fjgc 2、防止设备渗漏 发酵设备及附件由于化学腐蚀、电化学腐蚀，物料与设备摩擦造成机械磨损以及加工制作不良等原因会导致设备及附件渗漏。 设备上一旦渗漏，就会造成染菌，例如冷却盘管、夹套穿孔渗漏，有菌的冷却水便会通过漏孔而进入发酵罐中招致染菌。阀门渗漏也会使带菌的空气或水进入发酵罐而造成染菌。 设备上的漏隙如果肉眼能看见，容易发现，也容易治理；但有的微小泄漏，肉眼看不见，必须通过一定的试漏方法才能发现 。 发酵过程控制 染菌的防治 /jpkc/fjgc 试漏方法可采用水压试漏法。即被测设备的出口处装上压力表，将水压入设备，待设备中压力上升到要求压力，关闭进出水，看压力有否下降。压力下降则有渗漏。但有些渗漏很小，看不出何处漏水，可以用稀碱溶液压入设备，然后用蘸有酚酞的纱布揩，只要酚酞能变红处即为渗漏处。 阀门渗漏可以用集气桶来试漏。方法是先在集气桶中装满水，然后关闭所有阀门，向发酵罐中通入空气，使罐压上升到要求压力，一般一公斤以上。由于集气桶连通各管道，观察哪根管子冒泡，即这根管子的阀门漏气。 发酵过程控制 染菌的防治 /jpkc/fjgc 3、防止培养基灭菌不彻底 培养基灭菌方法——高压蒸汽灭菌 分批灭菌 1210C，30分钟 连续灭菌 罐温125－1300C，30－45分钟 发酵过程控制 染菌的防治 /jpkc/fjgc 蒸汽下进上出 发酵过程控制 染菌的防治 /jpkc/fjgc 连续灭菌设备流程 发酵过程控制 染菌的防治 /jpkc/fjgc 连 消 塔 发酵过程控制 染菌的防治 /jpkc/fjgc 培养基灭菌前含有大量杂菌，灭菌时如果蒸汽压力不足，就达不到要求的温度；灭菌时产生大量泡沫或发酵罐中有污垢堆积，就会窝藏大量杂菌，造成灭菌不彻底。 为什么蒸汽灭菌时会产生大量泡沫呢？ 培养基和水的传热系数比空气的传热系数大，如果灭菌时升温太快，培养基急剧膨胀，发酵罐内的空气排出较慢，就会产生大量泡沫，泡沫上升到发酵罐顶，泡沫中的耐热菌就不能与蒸汽直接接触，未被杀死。 发酵过程控制 染菌的防治 /jpkc/fjgc 防止方法： 缓慢开启蒸汽阀门，或加入少量消泡剂。 灭菌时还会因设备安装或污垢堆积造成一些“死角”。这些死角蒸汽不能有效达到，常会窝藏耐热芽孢杆菌，所以设备安装要注意不能造成死角，发酵设备要经常清洗，铲除污垢。 发酵过程控制 染菌的防治 /jpkc/fjgc 4、防止空气引起的染菌 空气过滤除菌设备流程 空压机 储罐 二级冷却 加热器 空气过滤 粗过滤