大鼠乳鼠皮肤成纤维细胞的分离和体外培养-新乡医学院学报.PDF

　第３３卷　第２期 新乡医学院学报 Ｖｏｌ．３３　Ｎｏ．２　 ·９６· 　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　 ２０１６年２月 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＸｉｎｘｉａｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｆｅｂ．２０１６ 欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁氉 欁 氉 欁 本文引用：韩瑞，孙永琨．大鼠乳鼠皮肤成纤维细胞的分离和体外培养［Ｊ］．新乡医学院学报，２０１６，３３（２）：９６欁 【基础研究】 欁 １００．ＤＯＩ：１０．７６８３／ｘｘｙｘｙｘｂ．２０１６．０２．００４． 氉欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁氉 大鼠乳鼠皮肤成纤维细胞的分离和体外培养 １ １，２ 韩　瑞 ，孙永琨 （１．新乡医学院基础医学院，河南　新乡　４５３００３；２．河南省医用组织再生重点实验室，河南　新乡　４５３００３） 摘要：　目的　建立大鼠乳鼠背部皮肤组织和尾尖部皮肤组织成纤维细胞的体外培养方法，并比较二者的区 别。方法　分别取大鼠乳鼠的背部和尾尖部皮肤组织，利用组织贴块法分离和培养皮肤成纤维细胞，用酶消化法进 行细胞传代培养，采用梯度温度冻存细胞。倒置显微镜下观察成纤维细胞的形态，用细胞骨架波形蛋白抗体进行鉴 定。结果　光学显微镜下３～５ｄ可见细胞从组织块游出，７ｄ细胞数量增多，１０ｄ可贴满培养瓶壁；且大鼠乳鼠背部 和尾尖部来源的皮肤成纤维细胞波形蛋白表达均为阳性。结论　大鼠乳鼠背部和尾尖部来源的皮肤成纤维细胞的 生物特点无差别，均可作为皮肤成纤维细胞的取材部位。 关键词：　皮肤成纤维细胞；原代培养；组织贴块法；细胞培养；波形蛋白 中图分类号：Ｑ９５４．６３３　文献标志码：Ａ　文章编号：１００４７２３９（２０１６）０２００９６０５ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｏｆｓｋｉｎｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｏｆｎｅｗｂｏｒｎｒａｔｉｎｖｉｔｒｏ １ １，２ ＨＡＮＲｕｉ，ＳＵＮＹｏｎｇｋｕｎ （１．ＢａｓｉｃＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＸｉｎｘｉａｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ４５３００３，ＨｅｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ；２．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｅｄｉ ｃａｌＴｉｓｓｕｅＲｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆＨｅｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ４５３００３，ＨｅｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｃｕｌｔｕｒｅｉｎｖｉｔｒｏｏｆｓｋｉｎｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｗｈｉｃｈｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄｆｒｏｍｂａｃｋ ａｎｄｔａｉｌｓｋｉｎｔｉｓｓｕｅｏｆｎｅｗｂｏｒｎｒａｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅｓｋｉｎｔｉｓｓｕｅｏｆｂａｃｋａｎｄｔａｉｌｏｆｎｅｗｂｏｒｎｒａｔｓｗｅｒｅｔａｋｅｎａｎｄｔｈｅｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｄｂｙｅｘｐｌａｎｔｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅｐｒｉｍａｒｙｃｕｌｔｕｒｅｄｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｄｂｙｅｎｚｙｍｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎ．Ｔｈｅｃｕｌ ｔｕｒｅｄｓｋｉｎｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｗｅｒｅｆｒｏｚｅｎｅｄｂｙｇｒａｄｉｅｎｔｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅｃｅｌｌｕｌａｒｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙｉｎｖｅｒｔｅｄｅｌｅｃ ｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．ＡｎｄｔｈｅｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｔａｉｎｉｎｇｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｔｏｏｂｓｅｒｖｅＶｉｍｅｎｔｉｎｉｎｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｓｅｖｅｒａｌ ｔｈ ｃｅｌｌｓｎｅａｒｔｈｅｔｉ