串联质谱-气相色谱质谱结果解读幻灯片.ppt

脂肪酸氧化代谢病相关酰基肉碱（中链、长链酰基肉碱） C0：游离肉碱 C8：辛酰肉碱 C10：葵酰肉碱 C12：月桂酰肉碱 C14：肉豆蔻酰基肉碱 C14:1：肉豆蔻烯酰基肉碱 C16：棕榈酰基肉碱 C16OH：3-羟基棕榈酰基肉碱 C18：十八碳酰基肉碱 C18OH：3-羟基十八碳酰基肉碱 线粒体脂肪酸?β-氧化代谢途径 细胞膜 胞浆 肉碱转运蛋白 脂肪酸 肉碱 肉碱 C12-C16 注：小于C8的脂肪酸不需肉碱传递？ 游离肉碱[C0、C0/(C16+C18)] □ C0增高 ?肉碱棕榈酰转移酶-I缺乏症（其他酰基肉碱正常，或降低） ?继发于肝功能损伤（伴其他多种酰基肉碱增高） ?静滴或口服左旋肉碱 □ C0降低 ?原发性肉碱缺乏症（伴多种酰基肉碱降低） ?继发于营养不良，有机酸血症，脂肪酸氧化代谢病，母源性肉碱缺乏症 辛酰肉碱增高（C8、C8/C3） □中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症 （C8增高，C10正常，C8/C10增高） □多种酰基辅酶A脱氢酶缺乏症 （C8、C10均增高，C8/C10正常） 多种酰基肉碱增高（C6、C8、C10、C12、C14、C16、C18） 多种酰基辅酶A脱氢酶缺乏症 肉碱棕榈酰转移酶-II缺乏症 肉碱/酰基肉碱移位酶缺乏症 继发于肝功损伤（伴C0、C2增高） 肉豆蔻烯酰肉碱增高（C14:1、C14:1/C8:1、C14:1/C16） □极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症（C14:1增高为主） □多种酰基辅酶A脱氢酶缺乏症 3-羟基棕榈酰肉碱增高（C16-OH、C16-OH/C3） 极长链3-羟酰基辅酶A脱氢酶缺乏症 多种酰基辅酶A脱氢酶缺乏症 进行了串联质谱检测， 为何还要进行气相色谱质谱检测？ 串联质谱检测的部分疾病需要气相质谱验证及鉴别 串联质谱检测 气相质谱检测 MMA 丙酰肉碱升高 甲基丙二酸，甲基枸橼酸 PA 甲基枸橼酸，3-羟基丙酸 OTCD 瓜氨酸降低 乳清酸，尿嘧啶 CPS 正常 MCC 3-羟基异戊酰肉碱增高 3-甲基巴豆酰甘酸 HMG 3-羟-3-甲基戊二酸 MGA 3-甲基戊烯二酸 Tyr-I 酪氨酸增高 琥珀酰丙酮增高 气相质谱检测疾病串联质谱检测血结果正常 鸟氨酸氨甲酰转移酶缺乏症：尿乳清酸、尿嘧啶增高 甘油激酶缺乏症：尿甘油酸显著增高 海绵体状脑白质病变营养不良：N-乙酰天冬氨酸 尿黑酸尿症：尿黑酸显著增高 甲羟戊酸尿症：甲羟戊酸增高 延胡索酸尿症:延胡索酸增高 GC-MS在遗传代谢病检测中的应用 应用现状：国际（日本，1966）；国内（华中科技大，同济医院，2003） 应用步骤：样品处理，GC-MS检测、结果分析判断 检测的疾病：30-40种 尿液前处理方法 取相当于0.2mg肌酐的尿样，加入尿素酶20ul混匀，37 ℃温育30min 加入托品酸、17烷酸、24烷酸各40ug 加入5%盐酸羟铵500ul、2.5N氢氧化钠400ul，调PH12-14混匀，室温静置60min 加入60N盐酸350ul，混匀，调PH1.0，离心，取上清液 加入乙酸乙酯5ml，混匀，离心，分取上清液，重复3次，离心3000转，5分钟 加入无水硫酸钠5g，混匀，离心3000转，5min，取上清液，60 ℃用氮气仪吹干 加入BSTFA与TMCS混合物100ul，80 ℃,30min（总时间：6h） 1ulQP2010GCMS 半定量分析-Screen软件 定性：依据保留时间（色谱）和参考离子（2个，质谱） 定量原理：依据内标17-烷酸的量，通过检测物的封面积与17-烷酸的峰面积比 定量性质：半定量 定量种类：134种有机酸，其中2种为内标 定量表达形式：文本格式 气相质谱检测结果分析（与有机酸血症相关） 乳酸：酮尿；乳酸血症 3-羟基丁酸、丙酮酸及乙酰乙酸：酮尿 甲基丙二酸：甲基丙二酸血症；继发性改变 甲基枸橼酸：甲基丙二酸血症；丙酸血症 3-羟基丙酸：丙酸血症；多种羧化酶缺乏症，酮尿 异戊酰甘氨酸：异戊酸血症；3-羟-3-甲基戊二酸尿血症 3-羟基异戊酸：多种羧化酶缺乏症 甲基巴豆酰甘氨酸：多种羧化酶缺乏症；丙酸血症；3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶缺乏症；?β-酮硫解酶缺乏症 气相质谱检测结果分析（与有机酸血症相关） 3-羟-甲基戊二酸：3-羟-3-甲基戊二酸尿症 3-羟基戊二酸：3-羟-3-甲基戊二酸尿症 3-甲基