提高新生大鼠原代心肌细胞纯度方法的探讨-世界科学技术-中医药.pdfVIP

世界科学技术—中医药现代化★中医研究 提高新生大鼠原代心肌细胞纯度方法的探讨＊ 1 2 2 2 2 2 ＊＊ 王新陆 ，崔　琳 ，王幼平 ，李　彬 ，谢世阳 ，朱明军 （1.河南中医学院　郑州　450000；2.河南中医学院第一附属医院　郑州　450000） 摘　要 ：目的：探讨提高新生大鼠原代心肌细胞纯度的方法。方法：应用0.08% 心肌细胞消化液重复消 化出生第 1-3 天乳鼠的心肌组织多次；收集的细胞用含10% 胎牛血清的DMEM 培养基中和。用差速贴壁 分离法分离后，加入红细胞裂解液，以除去红细胞，加入溴脱氧尿嘧啶（Brdu ）纯化心肌细胞后置CO2 培养 箱孵育2 天，无血清同步化1 天。结果：分离1 只乳鼠获得的心肌细胞产量约为1.2×106 个，有活力心肌细 胞占90% 以上，心肌细胞纯度90% ，3-4 天后心肌细胞融合成片，并出现自发性节律性搏动。结论：该方 法在保证心肌细胞产量和心肌细胞活性的同时，能大幅度提高心肌细胞纯度。 关键词 ：新生大鼠　心肌细胞　原代培养　鉴定 doi ：10.11842/wst.2015.02.007　　中图分类号：Q813.1　　文献标识码：A　 [1] 自1960年Haracy…L等 首次对乳鼠的心肌细 1　材料 胞进行培养以来，原代心肌细胞越来越多的用于实 1.1　实验动物 验中，经过国内、外学者对原代心肌细胞培养方法 1-3天新生SD乳鼠，雌雄不限，购自河南省动 的不断探索，原代心肌细胞的产量和活性都得到了 物实验中心，许可证号：41003100000662。 大幅度的提高。然而，随着实验的不断深入，对原 1.2　仪器 代心肌细胞的纯度要求也越来越高，尤其在探讨药 RCO-3000TVBB型CO 培养箱（美国REVCO2 物对保护心肌细胞、抑制心肌细胞凋亡作用时，心 公司），Olympus…CK40倒置显微镜（日本Olympus 肌细胞的纯度显得格外重要。心肌组织中的主要细 公司），AIRTECH生物超净工作台（江苏苏净集 胞为心肌细胞、心肌成纤维细胞、红细胞、血管内皮 团安泰公司），Thermo…Multiskan…MK3酶标仪 细胞、血管平滑肌细胞。血管内皮细胞、平滑肌细 （Molecular…Devices，Sperctra…MaxM3），IKAV-MAG… 胞数量较少，可以忽略，红细胞可以自行裂解。怎 HST型磁力搅拌器（中国苏州），TDL-50B低速台式 样最大限度的将心肌细胞和心肌成纤维细胞分离， 大容量离心机（德国Thermo…Scientific公司）。 是提高心肌细胞纯度的关键。本实验参照Simpson… 1.3　试剂 [2] P等 心肌细胞的培养方法并作了改进，探讨了乳 0.08%心肌细胞消化液（Trypsin…0.16…g，NaCl… 鼠心肌细胞的培养方法，观察了心肌细胞的形态、