实验二空气微生物的检验.ppt

一、实验目的 1、掌握平板沉降法空气采样原理及方法； 2、掌握空气中溶血性链球菌培养鉴定方法； 3、掌握空气卫生状况，用细菌总数以及溶血性链球菌总数多少来判断。 二、实验原理与仪器 1、 空气中溶血性链球菌主要是草绿色链球菌（甲型）和溶血性链球菌（乙型）数量的总和，链球菌在自然界分布广泛，常寄居于人类鼻咽腔和肠道内。链球菌种类很多，有能致病的，也有非致病的，根据链球菌在血平板培养基上得溶血特征，可以分为三类：甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、丙型溶血性链球菌。室内大部分是草绿色和溶血性链球菌，寄居于正常人呼吸道，可通过飞沫播散到周围空气中，其数量与人群密度和空气污浊度有关，卫生学意义较大。因此常把草绿色溶血性链球菌和溶血性链球菌作为空气卫生监测或空气污染评价指标。目前国家规定的方法是固体撞击法和自然沉降法。 2、 自然沉降法原理：根据空气中携带有微生物气溶胶粒子在地心引力作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上。经37℃，24h温箱培养计算出菌落数，应以菌落形成单位cfu/皿或cfu/m3来表示。 五、实验结果分析与报告 （1）溶血性链球菌是鉴定球菌最常用的项目，也是鉴定过程中重要的一步。 （2）甲型溶血性链球菌：血平板菌落周围部分红细胞被破坏，呈现一个草绿色溶血环。 （3）乙型溶血性链球菌：血平板菌落周围红细胞被全部破坏，呈现一个清楚透明的溶血环； （4）丙型溶血性链球菌：血平板菌落周围无红细胞溶解，无溶血环。 （5）镜检革兰阳性链状排列球菌，血平板上呈现溶血环，链激酶和杆菌肽敏感试验阳性可报告为溶血性链球菌。 空气微生物的检验 1）显微镜、培养箱、载玻片、酒精灯、接种环、灭菌镊子、离心机、水溶箱。 2）血琼脂平板、匹克肉汤、灭菌生理盐水、革兰染色液、杆菌肽纸片。 3、仪器与器材 三、实验步骤 1、样品的采集 5个采样点，离地面高度为1.5米，东、西、南、北、中各放置一个平皿，揭开盖子暴露15min,扣好盖子。 2、培养观察 36±1℃培养24h。 3、菌落形态观察及镜检 血平板：圆形突起，针尖状，灰白色半透明/不透明，边缘整齐，表面光滑，周围有溶血圈（α型和β型溶血）。 镜检：G+,链状排列，链长短不一（4-8个细胞，20-30个细胞）。 β 溶血性链球菌：血平板上菌落灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直径约0.5mm~0.75mm，为圆形突起的细小菌落，周围有2mm~4mm界限分明，无色透明的溶血圈。 α型溶血（草绿色链球菌）： β 溶血平板观察 生化 鉴定 1、革兰氏染色，阳性，G+链状排列，符合者可做生化鉴定。 2、生化鉴定 （1）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验） 吸取草酸钾血浆0.2mL，加0.8mL灭菌生理盐水，混匀，再加入链球菌18-24h36±1℃肉浸液肉汤培养物0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL，混匀，置于36±1℃水浴10min,血浆混合物自行凝固，观察凝块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不溶解即为阴性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。 （2）杆菌肽敏感试验（药敏试验） 将分纯的乙型溶血性链球菌接种血平板，在划线处贴附杆菌肽纸片，36℃，18h，出现抑菌带为阳性，（可推测为乙型溶血性链球菌）。 四、实验报告 根据培养后的形态，菌落特征及生化试验结果进行报告。 血平 普平 中 北 南 西 东 平均菌落数 菌落数 培养基