沉默KLF4表达对人肝星状细胞HSC-LX2生物学行为的影响.pdfVIP

河北医药 2017 年 4 月 第 39 卷 第 7 期 Hebei Medical Joumal 2017， Vol39 ， AprNo.7 981 doi 10.3969/j. issn. 1002 -： 7386.2017.07.005 • 仑 著 • 沉默KLF4 表达对人肝星状细胞HSC -LX2 生物学 行为的影响 李 涛 牛 丽 娟 刘 文 宣 杨 磊 李 曼 曹 丹 丹 彭 乱 顺 【摘要 】 目 的 筛选有效沉默 KLF4基 因 表 达 的 siRNA ，观 察K LF4 基 因 沉 默 对 人 肝 星 状 细 胞 HSC-LX2 生物学 行为的影响。方 法 设 计 并 化 学 合 成 针 对 人 K LF4 基 因 的 3 对 siRNA 〇iRN A l 、siRNA2 、siR N A 3) ，转染人肝星状细胞 HSC-LX2,以转染非特异 SiRN A作为阴性对照。采用实时荧光定量 RT- PCR( Real-time RT-PCR ) 和 Western b lo t 方法 分 析 KLF4 mRNA 和蛋白的表达情况，筛选出沉默 K LF4 效 果 最 好 的 1 f s i R N A ，将 其 转 染 入HSC-LX2后 ，用 M TT 法 检 测 K LF4 沉 默 对 HSC-LX2增殖的影响。采 用 ELISA 法检测细胞培养上清中的转化生长因子 1 (transforming growth factor ，T G F-l )、白介素 l(in te iie u k in -l ，IL -1 ) 和肿瘤坏死因子 a ( tumor necrosis factor-a ，T N F -a ) 的 表 达 情 况 。结果 Real-time RT- P C R 和 western b lo t 均 显 示 siRNA3沉默效果最好。故后续试验均采用 siRNA3沉 默 K LF4 的表达。MTT 实验结果显示，在 转 染 siRNA3， 12 h 、 24 h 和 48 h 后 ，细胞活力出现明显下降。ELISA 结果显示，转 染 siRNA3,48 h 以 后 ，T G F -pl 、TNF-a 、I L - lp 表达量也明显降低。结论 siR N A 3 可 有 效 沉 默 K LF4 基 因 表 达 ，K LF4 基因沉默可以抑制 HSC-LX2 的增殖，影响其生物学行为，使细胞中的促进胶原表达的三种细胞因子 T G F-l 、TNF-a 以 及 IL -1 表达量下降。 【关键词】 人肝星状细胞；KLF4; 转 化 生 长 因 子 p i ;肿 瘤 坏 死 因 子a ;白 介 素 1 【中图分类号】 R 329.447 【文献标识码】 A 【文章编号】 1002 -7 3 8 6 (2 0 1 7 )0 7 -0981 -0 4 Effects of silencing KLF4 expression on biological behaviors of HSC-LX2 in vitro LI Tao* , NIU Lijuany LIU Wenxuan * , et al. * Department o f Epidemiology and Health Statistics， Public Health College, Hebei Medical University ， Shijiazhuang Q5QQ17, China [Abstract] Objective To screen the siRNA which can effectively silence KLF4 expressions, and to