HIV抗体检测技术幻灯片.ppt

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HIV抗体检测技术幻灯片

HIV抗体检测技术 艾滋病病毒的形态 复检试验 对初筛呈阳性反应的样品,应使用 原有试剂和另外一种不同原理(或厂家) 的试剂,或另外两种不同原理或不同厂家 的试剂进行复检试验。 如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂,则复检必须包括一种抗原抗体联合试剂。 艾滋病检测筛查实验室复检判定为阳性反应的样品,确证实验室可以直接进行确证试验。 HIV快速检测试剂按原理不同,分为以下三类: 1 免疫渗滤试验:以硝酸纤维膜为载体,HIV抗原点状 固定在膜上。加待检样品后,阳性结果在膜上抗原部位显示出 有色斑点。有效试验质控点必须显色。 2 免疫层析试验:以硝酸纤维膜为载体,HIV抗原线状 固定在膜上,加待检样品后,阳性结果在膜上抗原部位显示出 有色条带。有效试验的质控带必须显色。 3 明胶颗粒凝集试验(PA):将HIV抗原致敏明胶颗粒 作为载体,加待检样品后。当待检样品含有HIV抗体时,明胶颗 粒与抗体发生凝集反应,根据凝集情况判读结果。 HIV P24抗原的检测 适用范围: ★HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断; ★ HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助鉴别诊断; ★第四代HIV-1抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性反应,但HIV-1抗体确认阴性者的辅助诊断; ★监测病程进展和抗病毒治疗效果。 检测方法:通常是采用ELISA双抗体夹心法。 结果报告和解释 HIV-1 P24抗原的阳性结果必须经过中和试验确认,若阳性标本的OD值比中和反应前减少50%以上,才确定为HIV P24抗原结果阳性。 HIV-1 P24抗原阳性仅作为HIV感染窗口期的辅助诊断依据,不能据此确诊。 HIV-1P24抗原检测的敏感性为30?90%,低于病毒载量测定。HIV-1P24抗原阴性结果只表示在本试验中无反应,不能排除HIV感染。 谢谢! PA法 (2)斑点EIA和斑点免疫胶体金(或胶体硒) 以硝酸纤维膜为载体,HIV抗原点状固定在膜上,加血清样品。 斑点EIA法用酶标记抗体,以后步骤同ELISA。 斑点免疫胶体金(或胶体硒)用红色的胶体金(或胶体硒)A蛋白标记,用渗滤法作为洗涤方法。 阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10 min以内,使用抗原量少。 快速诊断试剂 金标诊断试验原理 快速诊断试验 (3)免疫层析试验(金标法、硒标法) 以硝酸纤维膜为载体。 加样区:预包被胶体金-抗原/胶体金-protein A结合物 测试区(T):固定有重组HIV抗原, 质控区:抗HIV单克隆抗体/抗-protein A抗体 快速诊断试剂 全血样品 加50ul样品于样品垫中 手指血方法 静脉血方法 加一滴缓冲液 15分钟内读取结果 硒标法操作步骤 病人条 质控条 快速诊断试验 优点:试验简便快速,适用于应急检测、门诊急诊检测。不需专门设备和人员培训,一般可在10~30分钟内得出结果。 缺点:肉眼判断较主观、价格较贵、结果不易保存。 注意:一定要将试剂平衡至室温 快速诊断试剂 HIV抗体确认试验 确认试验的试剂: 必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。 确认试验方法: 免疫印迹试验(WB) 条带免疫试验(LIATEK HIVⅢ) 放射免疫沉淀试验(RIPA)及免疫荧光试验(IFA) 国内常用的确认试验方法是WB。 HIV抗体确认实验结果 a 强阳性对照(HIV-1和HIV-2) b弱阳性对照(HIV-1) c阴性对照 d典型的HIV-2血清阳性反应 a b c d gp160 gp120 p66 p55 p51 gp41 p39 p31 P24 p17 血清对照 HIV-2特异带 HIV核酸定性检测 规定了核酸检测、核酸序列测定的实验室条件、检测方法及结果判定标准 结果报告 : HIV核酸检测阴性:只可报告本次实验结果阴性。 HIV核酸检测阳性:可作为诊断HIV感染的辅助指标,不单独用于HIV感染的诊断。 严格的实验室管理制度(分区、仪器和材料的专用、单向流向、废弃物处理) HIV RNA定量测定(病毒载量测定) 方法 常用的HIV RNA定量测定方法有逆转录PCR试验(RT-PCR)、核酸序列扩增试验(NASBA)、分支DNA杂交试验(bDNA)。 HIV核酸定量检测的意义 辅助诊断:当RNA测定出现较高拷贝数的阳性结果时(3,000c/ml),感染

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