药物毒理学实验指导.doc

药物毒理学实验指导 南方医科大学药学院实验中心 二0一0年八月 目 录 实验一、药物急性毒性实验（LD50测定） 实验二、急性肺损伤实验 实验三、药物免疫毒性试验 实验四、小鼠骨髓细胞微核试验 实验五、小鼠精子畸形实验 实验六、药物生殖毒性实验 实验一 急性毒性试验 ［盐酸二甲弗林（回苏灵）LD50测定］ 一、实验目的 化学物急性毒性试验是研究化学物毒性效应的基本试验。本实验的目的是学习急性毒性试验的实验设计、实验原理和实验操作方法。 二、基本原理 选择健康的实验动物，根据体重按随机分组的方法，依据LD50计算的设计原料则将动物分成数个染毒组。一次或24h内多次给予受试物后，观察动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的情况等，根据各组动物死亡数计算半数致死量（LD50）。据此分析受试物毒性反应与剂量的关系，并根据LD50值对化学物进行毒性分级。 三、实验材料 1、器材 1ml注射器、烧杯、电子天平、苦味酸、镊子、剪刀、酒精棉球等。 2、药品 0.4％回苏灵注射液（经预试验后按比例稀释）。 3、动物 健康成年小白鼠若干只，体重18-22g，雌雄各半。 四、实验方法 1、预试验 （1）探索剂量范围：先找出100%与0%的致死量为实验的上下限剂量，即Dmax和Dmin。取动物若干，每4只一组，按估计量给药，如出现4/4死亡时，下一组剂量降低，当出现3/4死亡时，则上一剂量为Dmax；如降低一剂量出现的死亡率2/4或1/4时，应考虑到4/4死亡剂量组在正式实验时可能出现死亡率低于70%，为慎重起见可将4/4死亡剂量乘以1.4倍，作为Dmax。同法找出Dmin。 （2）确定合适的剂量分组方案：组数（n）以5-8组为宜，根据下面公式计算组间剂量公比r。 r=1/ 各组剂量分别Dmax、(Dmax) r、(Dmax)r2、(Dmax)r3……。 2、正式试验 （1）动物的称重、编号和分组： 每组10只动物（雌雄各半），随机分组和用苦味酸编号。 （2）受试物的配制： 根据预试验得出Dmin为4.0mg/kg，Dmax为8.0mg/kg，分为5个剂量组，根据公式计算r(0.85。配制时取第一个剂量组17ml加生理盐水3.0ml（按1：0.85稀释）作为第二个剂量组，依此类推配制其它剂量组。 （3）给药： 本次试验是用腹腔注射方法给药，0.2ml/10g体重。 （4）观察：给完受试物后即刻观察和记录30min内动物反应，包括一般活动情况、中毒体征、死亡前的特征、死亡动物数、死亡时间。 五、结果记录 1. 描述动物中毒和死亡反应的特征。 2. 参照下表和改良寇氏法的计算方法，计算回苏灵的LD50。 表1. 急性毒性实验结果列表 剂量（mg/kg） 对数剂量（X） 动物数 （只） 死亡数（只） 死亡率 （p） 存活率（q） p(q 4.18 4.91 5.78 6.80 8.00 0.621 0.691 0.762 0.832 0.903 10 10 10 10 10 0 2 5 7 10 0 0.2 0.5 0.7 1.0 1.0 0.8 0.5 0.3 0 0 0.16 0.25 0.21 0 i=0.07 ∑p=2.4 计算公式如下： Lg(LD50)= Xm－i（∑p－0.5） Xm=最大剂量对数值 P=动物死亡率 ∑p=各组死亡率的总和 i=相邻两组剂量比值的对数（高剂量做分子） 将数据代入公式，经计算得回苏灵注射液LD50=5.87mg/kg 实验二 急性肺损伤实验 一、实验目的 通过比较染毒动物与正常动物肺脏重量和形态的变化，学习评价外源性化学物急性肺损伤的基本方法。 二、基本原理 肺脏组织结构疏松，血流丰富，化合物引起的急性肺损伤以渗出、水肿和出血为主，通过比较肺形态、肺重量和肺灌洗液的变化，可以反应急性肺损伤的严重程度。 三、实验材料 1、器材 1ml注射器、5ml试管，电子天平、苦味酸、镊子、剪刀、止血钳、硫酸纸等。 2、药品 生理盐水、含4％油酸和16%二甲基亚砜(DMSO)的生理盐水混悬液。 3、动物 健康小白鼠，体重18-22g，雌雄各半。 四、实验方法 1．给药方法 动物称重，样品用注射器反复抽吸混匀后，以0.1ml/10g体重尾静脉注射。对照组尾静脉注射等剂量生理盐水。 2.观察 （1）小鼠尾静脉注射油酸后，观察一般状况、呼吸频率、呼吸深度等变化。 （2）肺形态和肺重量变化：注射后30分钟，小鼠处死，剖开胸腔,剪开颈部皮肤,分离皮下组织,于甲状软骨下缘夹住气管后分离出肺脏，观察油酸组和对照组的小鼠肺脏外观形态变化，如肿胀、充血、渗出等，并称取肺重量。 （3）肺灌洗：从气管注入1ml生理盐水，回抽的灌洗液注入刻度试管内，重复2次，观察灌洗液的外观和体积。 五