Survivin、Bcl—2、Pml基因表达和其和鼻咽癌临床分期和预后关系.doc

Survivin、Bcl—2、Pml基因表达和其和鼻咽癌临床分期和预后关系 　　[摘要] 目的 探讨鼻咽癌（NPC）患者Survivin、Bcl-2、Pml基因的表达情况，分析其与NPC临床分期及预后的关系。 方法 选取2010年1月～2012年5月本院与合作医院耳鼻喉科门诊收治的55例NPC患者和50鼻咽慢性炎症患者，将其作为临床研究对象。采用实时荧光定量PCR检测组织和外周血中Survivin、Bcl-2和Pml mRNA的表达，同时利用TUNEL法检测细胞的凋亡情况。 结果 NPC患者Survivin、Bcl-2、Pml基因表达阳性率分别为68.00%、74.00%、60.00%，均明显高于对照组；Ⅰ、Ⅱ期NPC患者Survivin、Bcl-2基因表达阳性率明显低于Ⅲ、Ⅳ期NPC患者，而Pml基因表达阳性率则明显高于Ⅲ、Ⅳ期NPC者；Survivin、Bcl-2、Pml阳性率患者放疗后1年后的生存率明显低于6个月后，差异具有统计学意义（P 0.05），具有可比性。 1.2 方法 采用免疫组化SP法检测Survivin、Bcl-2和Pml在组织中的表达情况，将NPC和鼻咽慢性炎症患者的组织标本经石蜡常规切片成4～5 μm后裱在用多聚赖氨酸涂好的玻片上，70℃下烤24 h后，切片脱蜡、水化后，再采取柠檬酸缓冲液微波法修复抗原，采取三步法步骤对Survivin、Bcl-2及Pml单抗进行组织化学染色，同时采用3，3-二氨基联苯胺（DAB）酶底物进行显色。Survivin、Bcl-2及Pml单抗及免疫组织化学所用试剂由北京中杉广州分公司提供。同时利用TUNEL法[3]检测细胞的凋亡情况，TUNEL法为采用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）介导dUTP缺口末端标记，实验以不含TdT的标记液代替TUNEL反应液作阴性对照。末端标记检测试剂盒为德国Roche Molecular Biochemicals公司产品，凋亡的原位检测采用TUNEL染色法按照试剂盒说明进行。NPC患者均采取放疗治疗，治疗后随访患者1年。 1.3 观察指标 观察NPC患者及鼻咽慢性炎症患者Survivin、Bcl-2、Pml基因的表达情况，同时比较不同临床分期NPC患者Survivin、Bcl-2、Pml基因的表达情况。以高倍镜视野下计数，以细胞浆或细胞核内有棕黄色、黄色颗粒或斑片的细胞为阳性细胞。Survivin、Bcl-2、Pml的评定标准为：癌细胞阳性的百分数≤5%为（-），6%～25%为弱（+），25%为（+）。调查记录NPC患者6个月后、1年后的肿瘤复发及生存率情况。 1.4 统计学方法 应用SPSS 17.0统计软件对本次研究所取得的数据进行分析，计数资料采用χ2检验，以P 0.05）（表3）。 表3 NPC患者放疗后6个月后、1年后肿瘤复发及生存情况[n（%）] 3 讨论 NPC是临床上较为常见的恶性肿瘤之一，居耳鼻喉恶性肿瘤之首。NPC的发病受多种因素的影响，遗传因素、病毒感染、环境因素与NPC的发病具有密切的关系[6-7]。近年来，对NPC发病机制的研究报道较多，大多数的研究显示NPC发病率存在较为明显的地域性和家族聚集现象，有研究发现NPC患者的基因组具有不稳定的特性，认为NPC是由多基因控制的侵袭性疾病，其发病与多种癌基因及抑癌基因的相关性改变有关[8-9]。NPC的发生与细胞的异常凋亡有关，异常的细胞凋亡易导致细胞的增殖分化紊乱，促进恶性肿瘤的发生发展，与NPC相关的三个凋亡基因分别为Survivin、Bcl-2、Pml基因。Survivin是一种最近发现的凋亡抑制蛋白，可抑制细胞的异常凋亡过程[10-12]。其抑制部位是凋亡的下游途径，通过对Caspase-3和Caspase-7活性的抑制而发挥阻断细胞凋亡的作用。Survivin在大多数恶性肿瘤中具有高度特异性的表达，若患者体内出现Survivin的过度表达，则提示细胞的增殖增强、凋亡减少，增殖和凋亡平衡被打乱从而致癌[13]。Bcl-2也是一种重要的凋亡抑制基因，临床上又称为白血病-2基因，主要定位于线粒体外膜上，是一种膜蛋白，其对凋亡的抑制过程是通过抑制凋亡复合体的形成、阻断Caspase级联切割程序而抑制细胞的凋亡。Pml基因的表达在急性早幼粒细胞白血病的发病过程中具有极其重要的作用，其表达的蛋白质是一种广谱的细胞生长抑制因子[14]。人体正常组织及肿瘤组织均可一定程度上表达Pml基因，生理性增生组织中Pml基因呈低表达，而病变组织中Pml基因呈高表达状态，并能诱发细胞的异常凋亡。有研究显示，Survivin、Bcl-2、Pml基因在NPC患者中呈不同的表达情况，Survivin、Bcl-2、Pml基因在NPC中呈高表达，且与