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乳腺癌her检测
HER2 表达在原发肿瘤和转移灶呈高度一致 随着肿瘤的靶向性治疗的发展,以单抗为主的分子靶点药物的不断研制应用,已成为肿瘤靶向治疗的新武器 Herceptin即为一种针对HER2受体的高纯度重组DNA衍生物的人源化单克隆抗体,是乳腺癌治疗领域的第一个分子靶向性药物 意义 靶向药物Heceptin仅对HER2扩增的乳腺癌有效 →准确的检测HER2有无扩增是临床应用Heceptin的绝 对必要条件,也是成功进行靶向治疗的前题和关键 HER-2扩增的乳腺癌往往提示其恶性程度高,进展迅 速,化疗缓解期短,对CMF方案化疗反应降低 → 乳 腺癌化疗药物环磷酰胺、阿酶素、5-氟尿嘧啶等 的主要参考指标 HER-2扩增的乳腺癌对蒽环类药物和紫杉醇类药物化 疗敏感性高 → HER2和拓扑异构酶II-a基因同时扩 增的乳腺癌患者,可以从蒽环类药物为基础的方案 中受益,故同时检测HER2和拓扑异构酶II-a可以筛 选出以蒽环类化疗药为基础的化疗方案候选患者 HER-2扩增的乳腺癌对三苯氧胺易产生耐药性 → 制 定内分泌治疗方案的有力依据 HER-2扩增的乳腺癌无病生存率和总生存率低,并且 与淋巴结阳性、癌的高级别、阴性受体状态及高增 殖活性有关 → 预后判断的参考指标 比值 2.2 提示Her-2无扩增 比值 2.2提示Her-2有扩增 比值介于1.8~2.2临界值 Aneusomy, Not amplified 2+ 3+ C-erbB2 HER-2 检测: IHC 抗原修复 有 / 无 组织固定 方法 抗体选择 评分标准 变异性 福尔马林固定/石蜡包埋组织 HER 基因扩增2-5倍 (Southern Hybridization) Slamon et al, Science 244:712, 1989 HER2 “阴性” 是由于组织固定后抗原被遮蔽 需要行抗原修复来纠正 Courtesy Michael Press FISH 是一种分子细胞遗传学技术,通过荧光标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交。在荧光显微镜下,于细胞和(或)组织原位观察并分析细胞核内杂交于DNA靶序列的多种彩色探针信号,以获得细胞内多条染色体(或染色体片段)或多种基因状态的信息。 “金标准” HER2 gene HER2 gene HER2 gene 双链靶基因 变性的单链DNA 与荧光标记探针复性\产生荧光信号 荧光原位杂交法原理 Fluorescence in situ Hybridisation (FISH) HER2探针 绝大部分是同时含有HER2基因(标记为橘红色荧光)和该基因所在的17号染色体着丝粒(标记为绿色荧光)序列的混合探针 经美国FDA批准的进口探针 VS 国产探针 评价17号染色体数目和意义 HER2基因位于17号染色体上,大约有47%的乳腺癌存在17号染色体非整体性,即17号染色体不是正常的二体,而是单体或多体。 绿色探针可以将17号染色体的非整体性和单纯的HER2基因扩增,尤其是低水平的扩增区分开。 当HER2基因与17号染色体数目比值大于2时,即为HER2基因扩增。 加入了这个内对照,就排除了单色探针(探针中仅有HER2基因)可能造成的假阴性(17号染色体单体)或假阳性(17号染色体多体)。 临床研究显示,具有这类遗传学特征的患者对治疗的反应和预后与单纯的基因扩增明显不同。 质量控制 内对照:杂交的组织、细胞中有75%的细胞核显示出双色信号时,视为实验成功,并且红、绿信号互为对照,癌与非癌细胞互为对照。 外对照:应选择FISH阳性和阴性的标本片。 结果判读 杂交信号计数 应选择细胞核大小一致、核的边界完整、二脒基苯基吲哚(DAPI)染色均一、细胞核孤立无重叠、绿色着丝粒信号清晰的细胞。 随机计数20~30个癌细胞核中的双色信号。 判读标准 红色信号的总数与绿色信号的总数比值2.2时,即为HER2基因扩增 若红、绿两信号的比值20或众多信号连接成簇时可不计算,即视为基因扩增; 若比值介于1.8~2.2之间,则需要再计数20个细胞核中的信号或由另外一个分析者重新计数。如仍为临界值,则应在FISH检测报告中注明。 若HER2基因扩增在不同癌细胞中存在异质性时,应在另一癌区域再计算20~30个癌细胞核中的红、绿信号值,报告其最大值,并加以注释。 注意避免G2期细胞内的基因拷贝数目特征(4个拷贝)可能导致的计数误差。 HER2 probe CEP 17 probe HER2 / CEP17 ratio = 1 HER2 / CEP17 ratio = 1 HER2 / CEP17 ratio = 7
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