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组织培养技术 Tissue Culture Techniques (In Vitro Culture) 概述 Ⅰ. 绪言/Introduction Ⅱ. 细胞生长的基本需要/ Basic requirement of cell growth Ⅲ. 细胞培养的配备/Equipment Ⅳ. 清洁、消毒与灭菌/Cleaning , Disinfection and Sterilization Ⅴ. 无菌操作/Aseptic technique Ⅵ. 培养细胞的形态/Morphology of culture cell I.绪言/ Introduction 1.概念/Concept 2.发展史/Developing history 3.应用/Application 1.概念 体外培养/In vitro culture ——将动植物活体内取出的组织、细胞或器官等，放置在类似体内生存环境中，使其维持、生长或繁殖的方法。 whole culture microorganism parasite organ culture parts culture tissue culture cell culture 器官培养/Organ culture 体外器官原基或整个器官或部分器官的维持或生长，包括结构和功能上的维持和分化。 （The maintenance or growth of organ primordia or the whole or parts of an organ in vitro,in a way that may allow differentiation and preservation of the architecture and/or function.） 组织培养/Tissue culture 体外组织的维持或生长，包括结构和功能上的维持和分化。 （The maintenance or growth of tissue in vitro,in a way that may allow differentiation and preservation of the architecture and/or function.） 组织块（O.5～1立方毫米）或薄片（厚0.2 毫米） 细胞培养/Cell culture 是指单细胞在体外培养。 （This term is used to denote the growing of cell in vitro, including the culture of single cell. ） 通常体外培养中的单细胞不再形成组织。 细胞培养也称为组织培养（tissue culture），二者可作为同义语使用。 细胞培养的类型/Types of cell culture （1）原代培养/Primary culture （2）传代培养/ Subculture （cell line） （1） Primary culture ——直接来自活体的细胞（组织或器官）的初次培养。 （A culture start from cells,tissues or organs taken directly from organisms.） 严格地说，是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然保留二倍体数。 实际应用上，常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。 新生大鼠肺成纤维细胞（原代）培养的天数：48h 放大倍速：倒置显微镜 X40培养基种类：1640+10%小牛血清 细胞状态与特征简述:细胞呈梭形，有伪足，边缘清晰整齐，贴壁生长 幼兔骨髓基质干细胞（原代）：细胞种类：幼兔骨髓基质干细胞 培养的天数：五天后放大倍数：倒置显微镜 X40培养基种类：DMEM+20%胎牛血清细胞状态与特征简述:细胞呈梭形，有伪足，边缘清晰整齐，贴壁生长 传代/passage or subculture 将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶的过程。 当细胞增殖达到一定密度后，则需要分离出一部分细胞和更新营养液，否则将影响细胞的继续生存 培养细胞的“一代”，不表示细胞分裂一次，而是指培养细胞从接种到再次转移培养的过程。 原代培养细胞的生命归宿 原代培养期 传代期 衰退期 （2）Subculture 细胞系/Cell line ——原代培