Pyrosequencing技术及其应用.ppt

Pyrosequencing? Technology- PyroMarkTM ID DNA分析系统 Jiabing Cao Application Department Gene Company Ltd 关于Biotage Pyrosequencing这项专利技术完全由Biotage公司拥有 Biotage的前身即Pyrosequencing AB 成立于1997年，总部位于瑞典第三大城市Uppsala 2003年并购另外两家公司后更名为Biotage AB 公司通过直接销售部门及代理商已向全世界40多个国家提供了超过600套Pyrosequencing系统 随着Pyrosequencing技术应用领域的不断拓展，近两年来，其市场也呈现快速增长的趋势 作为一家高技术公司，强大的技术支持队伍是我们引以为傲的资源 超过30％的职员从事客户与技术支持工作 Pyrosequencing焦磷酸测序技术的特点 唯一得到定量序列结果的技术 极高的准确性 Built-In QC 重现性极佳，接近100% 通用型技术平台 功能多样，应用领域极广 可以用于任何遗传多态性的分析 甲基化研究的最佳平台 高通量、低成本, 快速临床微生物诊断手段 实验设计灵活 自动化程度高，操作简单 As easy as PCR， as reliable as sequencing 强大的技术支持 What are ”Inbuilt Controls”? Pyrosequencing： facility convenience 实验设计方便，使用Assay Design SW方便快速设计反应的最佳引物。 实验快速，96个样本，SNP反应10分钟左右，SQA测序反应1小时左右，2分钟完成数据结果分析。 实验准确性好，重复性高： 准确性接近99％ 重复性接近100％ 高通量，一次可以完成96个不同样本的反应和分析。 自动化程度高，准备好PCR单链后，反应和结果分析软件自动进行，利于标准化。 操作简单，方便学习和使用。 As easy as PCR， as reliable as sequencing Pyrosequencing 的运用 What Pyrosequencing can do in Genetic Variation Analysis SNP Analysis Insertion and Deletion Mutation Analysis Allele Frenquency Determination CpG Methylation Estimation Gene Copy Number Transcription Estimation 由于PyrosequencingTM技术可以通过光信号强度来定量，所以除了可以进行双等位点分析外，还可以用于三等位、四等位位点的分析，而且能准确判断纯合与杂合 软件设计周到，具备强大的数据处理能力，可以通过一个反应来分析多个相邻位点 准确性好，重现性高 SNP位点在不同人群中的分布频率，是群体遗传学研究中的一项重要内容 这些位点在正常人群与病人群体中的等位型的分布差异,更是流行病学、分子病理学乃至分子诊断的一项重要课题 PyrosequencingTM 技术结合Pooling方法运用于等位频率分析 准确灵敏：定量范围5%-95%甚至更高 简便：反应结束后软件自动给出每个样品的等位频率, 无需人工进行统计 快速：只需其他方法十乃至千分之一的时间 低耗：降低时间消耗的同时，成本百倍下降 Pyrosequencing：Accurate Quantifying Pyrosequencing：结合Pooling方法进行等位频率分析的技术 Pyro Q-CpG 软件 专门用于甲基化研究的软件 结合PyroGold SQA 试剂盒，可以对100bp序列内的20多个甲基化位点进行定量分析。 实验设计更方便，特别对多个连续的甲基化位点检测具体巨大优势。 需要的PCR引物盒测序引物更少，更加节约试剂，降低实验成本。 Pyrosequencing：临床检验的未来 载脂蛋白E（APOE）与脂类转运及脂蛋白代谢密切相关 APOE的编码基因有3种最常见的等位基因型：e2，e3和e4 三者之间的主要区别在于2个位点的多态性所导致APOE蛋白112位及158位氨基酸替换 3种等位基因在不同的人群中有不同的分布 e3是在人群中分布最为普遍的 e4 会提高总胆固醇浓度，增加晚发性家族型及散发性AD的发病风险，提早发病年龄；是胎儿期因碘缺乏引起的智力缺陷的风险因子；还与肾病及糖尿病的发病有关 e2则能够降低总胆固醇及AD的发病几率，同时可能与长寿相关 Pyrosequencing：临床检验的未来 Pyroseque