免疫血液学实验的质量控制.ppt

免疫血液学实验的质量控制 广州血液中心 汪 传 喜 2006年卫生部颁布的《血站实验室质量管理规范》对血站免疫血液学实验提出了具体要求。 许多因素会影响免疫血液学实验结果： 仪设备器（离心机、冰箱、孵育箱、加样器）；检验试剂（定型血清、标准细胞、其它试剂）；实验方法（实验的选择、对照实验、环境）；实验室相关文件（标准操作规程、标记、登记、记录、报告）等影响。 如何对相关因素进行控制以保证实验结果的准确性和可靠性，对免疫血液学实验具有重要意义。 一、免疫血液学检测基本要求 ? 1.?对血液免疫血液学检测项目、方法和结果的判定标准如下： ABO血型鉴定，检测方法为直接血凝试验，检测结果以正反定型相符合方可确定其血型。如正反定型不符，应作进一步试验。 ABO亚型鉴定，检测方法为直接血凝试验、血凝抑制试验、吸收放散试验，根据病史和以上试验结果，确定被检者血型。 RH系统血型鉴定，检测方法为直接血凝试验或抗人球蛋白试验，检测结果以呈凝结反应为阳性，无凝结反应为阴性。 RH(D)阴性确认，检测方法为血凝试验、抗人球蛋白试验，以三个不同克隆株或不同人的IgG抗D血清进行检测，全部不凝为RH阴性，部分凝结为D变异型。 抗体筛选和抗体鉴定，检测方法为直接血凝试验、抗人球蛋白试验、聚凝胺试验。检测结果呈无凝结反应，为抗体筛选阴性，反之，抗体阳性。并确定其特异性。 交叉配血，检测方法为直接血凝试验、抗人球蛋白试验、聚凝胺试验。检测结果呈无凝结、无溶血反应为配合。 ? 2.对血液免疫血液学检测项目，应使用不同厂商生产的试剂，对每项试验均要作阴阳性对照。 3.实验室的基本设备应包括离心机、水浴箱、显微镜、各种冷冻冷藏设备及其他专用设备。集中化检测实验室应配备与其功能相适应的检测设备。应对实验室的关键设备进行确认，定期校准和维护。 4.?建立和实施试剂的管理程序，包括： 4.1试剂的评估程序，包括生产商和供应商的（国家规定的相应）资质，试剂的技术要求。 4.2试剂的确认程序，包括实施确认的人员、方法、质量控制方法、接受标准、每批试剂投入使用前应进行确认。 4.3试剂的库存管理程序，应包括试剂的贮存条件和库存量的监控，试剂应在有效期内使用。 5. 建立和实施实验室内部质量控制程序，其基本要求如下： 5.1 在每次试验时，观查试剂是否有不正常外观，包括试剂红细胞有无明显的溶血或混浊：血清试剂无沉淀物和颗粒或胶状物形成。 5.2 在每项试验中，注意试剂敏感性和特异性：ABO正定型阴阳性对照细胞反应需清晰明确：反定型与抗A、抗B（抗AB）反应需清晰。 5.3 RH(D)血型试剂与已知的阳性和阴性质控细胞反应清晰。 5.4 抗人球蛋白试验质控细胞与抗人球蛋白试剂反应有1+～2＋，与生理盐水反应阴性。 5.5 抗球蛋白试剂（抗IgG和抗C3d）应与任何ABO血型的非致敏红细胞与相容的血清孵育后无溶血和凝集反应；与被稀释的抗IgG(D)和红细胞的敏感性凝集在显微镜下可见1+～2+。 5.6 抗体筛选和鉴定细胞（纯合子剂量效应），需用在生理盐水中反应弱的抗P和抗人球蛋白中反应1+～2+的抗D来测定。 5.7应实施日常的质控试验记录，包括试验的反应性，商业来源试剂的批号，试验日期和试验者的签名。 6. 建立对新的试剂进行检测程序，新的试剂应在常规工作中试用一周，或至少做五十份标本，包括2～3份ABO亚型和2～3份弱D抗原。 7.完成检测后的血清或血浆标本，应在2～8℃的条件下保存2周。 练习 写一份购买ABO血型试剂和红细胞试剂 的步骤说明， 并设计试剂认证的策略 试剂认证的原则 注意： 试剂必须具有： 特异性 可接受的亲和力和效价 无污染 微生物检测为阴性 不引起溶血 标准的标识识别颜色 尽可能是单克隆 试剂必须标有： 特异性 批号 生产日期 有效期 生产商厂 保存条件 试剂的说明书中必须附有的其它信息： 使用方法 克隆的名称/编号 使用的限制条件 储存标准 如果需要还可以有以下的内容： CE/FDA的证书或相关的证书 说明书也要有实际运用时的考虑事项，如： 体积 一滴的体积 瓶子质地（玻璃/塑料） 供应和输送 如果购买试剂，需要给出派送的各个细节要求。相同批号的试剂至少能保证用到一年。 二、免疫血液学实验的质量控制 ? 1、免疫血液学实验的影响因素 1.1设备 包括离心机、水浴箱、显微镜、各种冷冻冷藏设备及其他专用设备。 离心机，应使用血库专用离心机。 要注意的是离心力≠离心转速，离心力还与转子的半径