凡纳滨对虾抗菌肽crunstinA在毕赤酵母菌中的表达.pdfVIP

南方农业学报 Journal of Southern Agriculture 20 17 ，48（7 ）：1310-1316 ISSN 2095-1191； CODEN NNXAAB 南 方 农 业 学 报 http://www.nfnyxb4.8co卷m DOI ：10.3969/j .issn.2095-1191.20 17.07.30 凡纳滨对虾抗菌肽crunstinA在毕赤酵母菌中的表达 1 2 2 2 2 2 2 * 马春霞 ， 彭金霞 ， 何苹萍 ， 雷爱莹 ， 马 宁 ， 王 瑞 ， 黎 铭 1 2 （广西兽 医研 究所 ， 南宁 53000 1； 广西水产科 学研 究院/广西遗传育种与健康养殖重点实验 室， 南宁 53002 1） 摘要 ：【目的】明确凡纳滨对虾抗菌肽crunstinA （LvcrustinA ）在毕赤酵母菌 中的表达情况 ，为研发出一种基于重组 蛋 白crustinA 的新型水产药物打下基础 。 【方法 】采用全基 因合成法（PAS ）合成LvcrustinA基 因，然后将LvcrustinA基 因 克 隆至真核表达 载体pYE-GAPα ， 所得重组质粒转化感 受态 细菌TOP 10 ， 以质粒 提取试 验 盒 提取 的重组 质粒 pYE-GAPα-LvcrustinA 电转 至 毕 赤 酵 母 菌 GS115 ； 以SDS电泳 检 测 和Western blotting 鉴 定 分 析 融 合 蛋 白 LvcrustinA 的表达情况 ，并通过保护试验验证融合蛋 白LvcrustinA对副溶血弧菌的抵抗作用 。 【结果 】以构建 的重组质 粒pYE-GAPα-LvcrustinA 电转毕赤酵母菌GS115 ，获得的重组菌株在30 ℃下摇床（220 r/min ）培养24 h 即可获得融合蛋 白LvcrustinA ，且随培养时间的延长 ，其表达量逐渐增多。Western blotting鉴定结果显示 ，纯化的融合蛋 白LvcrustinA能 被抗His抗体识别 。 保护试验结果表明，融合蛋 白LvcrustinA对副溶血弧菌具有 良好 的抵抗力 。 【结论 】利用表达质粒 pYE-GAPα和酵母菌GS115可成功重组表达获得LvcrustinA ， 且获得的LvcrustinA具有促进凡纳滨对虾抵抗副溶血弧 菌感染 的作用 。 关键词 ： 凡纳滨对虾 ； 抗菌肽 ； 毕赤酵母菌 ； 真核表达 中图分类号 ： S945.46 文献标志码 ：A 文章编号 ：2095-1191（20 17 ）07-1310-07 Expression of Litopenaeus vannamei antimicrobial peptide crunstinA in Pichia pastoris 1 2 2 2 2 MA Chun-xia ， PENG Jin-xia ， HE Ping-ping