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快速发展中的利用符合 药品生产质量管理规范 (GMP)要求 的Biacore 系统测定抗体浓度的分析方法 本篇文章所用的实验数据是由德国慕尼黑Micromet AG公司的Birgit Vetter，Susanne Schade，Thomas Urbig 博士和Frank Hanakam博士所提供的，在这里， 我们对他们深表感谢。 简介 偶联分子偶联条件的优化 在利用重组技术或者杂交瘤技术进行蛋白质产品生产时，生 为了测定不同批次之间蛋白A 偶联水平的一致性，我们将来 产质量管理规则要求操作人员在整个生产过程中，必须使用 自于16个不同批次的蛋白A 偶联在已经被检验过的传感芯片 有效的检测手段对所生产的蛋白质产品的浓度进行全程监测。 CM5 上。将预先已经制备好了、浓度为10 g/ml 的蛋白A 以 人源单克隆全抗体——抗EpCAM IgG1抗体可以被用来治疗前 5 l/minute 的速度流经传感芯片表面，7 分钟后对偶联水平 列腺癌 (Naundorf et al., 2002)，在这里，我们以此抗体为例， 进行检测，结果发现16种不同批次蛋白A 的偶联水平在1500 简要地介绍了一个有效的Biacore检测方法的建立过程。这个 和2500 RU 之间变化 (图1)。这说明在所采用的操作条件下， Biacore检测方法能够在样品收获阶段、生产过程阶段以及最 不同批次蛋白A 的偶联水平之间没有显著性差异。这表明我 终获得产品阶段等生产环节过程中，对抗EpCAM IgG1抗体的 们已经建立起可以获得相似的蛋白A 的偶联水平的实验操作 浓度进行全程监控。操作人员只需要对检测条件进行三个月 条件，可以对检测分析方法的下一步的操作过程进行优化了。 的优化，就可以建立起一个精确的、可靠的监测抗 EpCAM IgG1 抗体浓度的检测方法。 来自于同一厂家、不同批次的蛋白A 的偶联水平 检测方法的有效性：前提条件 虽然目前尚未有权威性的政策法规对有关配体结合数据的有 效性进行规定，但是人们普遍地将美国的食品及药物管理局 (FDA)所颁布的《Guidance for Industry Bioanalytical Method Validation and Guidance for Industry: Analytical Procedures and Methods Validation Chemistry，Manufacturing，and Controls Documentation》作为进行配体结合分析设计的指导性规范准 图1. 在已经被检验过的传感芯片CM5上对来自于同一厂家，16个不 则。除了那些已经被广泛接受的行为准则以外，独立的质量 同批次的蛋白A 的偶联水平进行检测。10 g/ml 的蛋白A 以5 l/ 评估部门被要求必须要遵守人用药品注册技术规定国际协调 minute 的速度持续流经传感芯片表面7 分钟，然后进行检测，其平 会议 (ICH)目前所制定的有关检测分析有效性的相关规定。 均偶联水平为 1970 ±137 RU (CV 7.0%)。 一旦将Biacore检测分析方法的基本设计构思确定下来，研究 当偶联完成后，我们用一系列不同浓度的单克隆抗体MT201 人员就必须依靠经验摸索检测分析方法的操作条件。在这里， 流经每一个流动池，然后测定抗体的结合水平。我们发现当 我们根据上面所述的美国食品及药物管理局的有关规定，使 把上面所描述的蛋白A 偶联时所用的实验条件作为抗体结合 用传感芯片CM5，构建了一个Biacore检测分析方法。传感芯 实验条件时，单克隆抗体MT201 的结合水平可以达到最佳状 片CM5 是一块表面上偶联有可以与抗体IgG 特异性相结合的 态。实验表明，提高蛋白A 的偶联水平不能够使得抗体MT201 蛋白A 分子的芯片，它可以捕获人源单克隆抗体。研究人员 的结合水平得到进一步的增强 (图2)。 需要对芯片的偶联分子的偶联过程、芯片表面的再生以及传 感芯片的贮存等方面进行研究。只有将所得到的数据进行分 析后，研究人员才能最终确定检测分析方法的最佳操作条件。