G蛋白偶联受体37的基因突变与自闭症发病机制相关性的研究.pdf

山西医药杂志 2014年 1月第43卷第2期 ShanxiMedJ，January2014，Vo1．43，No．2 · 基础研究 · G蛋 白偶联受体 37的基 因突变与 自闭症 发病机制相关性的研 究 俞志凌 赵 旭 宛 洋 李 杨 泛 自闭症障碍症候群 (ASD)是一种神经发育 ASD患者淋巴细胞 ，包括 自闭症 、普通 的发育障碍 障碍性疾病 ，它 的主要特征为交流障碍 ，社会能力 以及阿斯伯格综合征 。这些患者都是根据 《精神疾 缺失 ，刻板 的兴趣和重复 的行为。 目前有文献 病诊断与统计手册》(DSM—IV)标准诊断的。有 57 [1—5]报道已经确定了NLGN3、NLGN4、CADM1、 例男性和 15例女性 ，年龄 3～23岁。他们 的智商 CNPNAP2及 SHANK3为 自闭症 的相关性基 因。 和语言能力不 同，有严重低下者 ，也有正常者 。4 此外 ，TSC1／2的突变也可能与 自闭症相关_6]。但 例患者的兄弟姐妹也患有 ASD，而其余均为散在 是 ，这些基 因突变导致 自闭症 的分子机制 尚不清 发病。对照组来 自健康志愿者 。 楚。 1．2 细胞培养 ：在 RPMI1640培养液 (Invitrogen， ASD发病的分子机制可能与抑制性和激动性 AucklandNz)加入 10 胎牛血清 (Equitech-BIO 受体的失衡有关。在 NLGN3(R451C)Er]与 自闭症 INC，TX)，100U／mL青霉素和 100mg／mL链霉 相关基因突变 的小 鼠上 一氨基丁酸 的功能发生改 素，在 37。C，5 CO。细胞培养箱中培养淋巴细胞 。 变。GABRB2水平在 CADM1基 因敲除 的小 鼠上 1．3 聚合酶链式反应(PCR)扩增：利用标准方法 有改变。G蛋 白偶联受体 (GPCRs)是 由7个跨膜 从外周血淋巴细胞及淋 巴母细胞中提取 出基 因组 域组成，它在许多生物进程 中起着重要的作用，如 DNA。所有外显 子及其 界限区 GPR37分别 由 激素受体和神经递质受体过程 ，此外，它包括 7一氨 PCR扩增 。GPR37的引物序列被列在表 1。PCR 基丁酸受体和其他受体等_8]。大多数的G蛋 白及 在 50 L的反应容积 中进行，此容积 中有 10×PCR GPCRs在大脑 中表达，调节突触的传导及形成，对 的缓冲区，200肚m 的dNTPs，100ng的基因DNA， 大脑功能及神经发育起着重要 的作用_lg]。此外 ， 0．5 m 的引物和0．25U的耐热DNA聚合酶 。在 GPCRs信号的改变与许多神经障碍有关，包括畸 PCR基 因扩增系统 9700中进行 ，在 94℃下 5min 形、精神病及智力障碍等 。导致智力低下的基 因大 使其变性 ，然后在 94℃下 30S中35个循环 ，然后 多数为 G蛋 白，GPCRs合成 的基 因，或者是与 退火 30S，在 72℃下保持30S，在 72。C中7min进 GPCRs、小分子 G蛋 白相关 的基 因_】。 行最后的扩增。GPR37的引物序列见表 1。 G蛋 白偶联受体 37(GPR37)更为人关注 ，因 1．4 变性高效液相色谱分析 (DHPLC)：将 2种