G蛋白偶联受体激酶4突变A142V基因对大鼠血管平滑肌细胞AT1受体的影响.pdf

重庆医学 2013年 11月第42卷第33期 3977 · 论 著 · G蛋 白偶联受体激酶 4突变 A142V基因对大鼠血管 平滑肌细胞 AT 受体 的影响 邓 昆 。，刘 莉 ，陈彩宇 ，陈 垦 ，王 微 ，周永巧 ，何 多芬 ，曾春雨 (1．第三军医大学大坪 医院野战外科研究所心血管 内科 ／重庆心血管病研究所 ，重庆 400042； 2．77263部 队 医院，云南大理 671000) 摘 要 ：目的 研究人 G蛋 白偶联受体激酶 4(GRK4)变异体 A142V对大鼠血管平滑肌细胞 (VMSCs)血管紧张素 Ⅱ1型 (AT )受体及其介导的VMSCs增殖的影响，以期 了解 GRK4引起原发性 高血压 的原 因。方法 构建与增强型绿 色荧光蛋 白 (EGFP)融合表达的慢病毒载体，包装慢病毒，感染A10细胞并进行鉴定；免疫印迹方法检测 AT1受体蛋 白变化；采用分光光度 法检测GRK4活性，免疫共沉淀检测 GRK4和 AT1受体的共连接；[。H]胸腺 嘧啶掺入的方法检测增殖变化。结果 转染 hGRK4TA142V细胞 的GRK4酶活性显著升高，AT 受体表达显著升高，GRK4和 AT 受体共连接作用降低 ，AngII刺激细胞增 殖效应显著增强。结论 转染hGRK4变异体 A142V增加 GRK4活性，引起 AT 受体的功能增强和 VMSCs的增殖作用增加 。 关键词 ：高血压 ；G蛋 白偶联受体激酶 4；受体 ，血管紧张素，1型；血管平滑肌细胞 doi：10．3969／j．issn．1671—8348．2013．33．O。1 文献标识码 ：A 文章编号：1671-8348(2013)33—3977-03 RegulationofhumanG-coupledproteinkinase4A142V onAT1receptorinratvascularsmoothmusclecells DengKun ，LiuLi，ChenCaiyu ，ChenKen ，Wang ，ZhouYongqiao ，H Duofen ，ZengChunyu (1．DepartmentofCardiology，InstituteofFieldSurgery，DapingHospital，the r MilitaryMedicalUniversity／ ChongqingInstituteofCardiology，Chongqing400042，China；2．No．77263MilitaryHospital，Dali，Yunan671000，China) Abstract：Objective TostudytheeffectofhumanG-coupledproteinkinase4(GRK4)A142Voverexpressiononangiotensin Ⅱ 1type(AT1)receptorandits—mediatedproliferationofratvascularsmoothmusclecells．Methods W econstructedalentiviralvec— torcarryinghumanGRK4一EGFPgeneandobserveditsexpressioninA10cells．ExpressionofAT1receptorweredeterminedbyim— munoblotting，GRK4activitywerecheckedbyspectrophotometry；thelinkagebetweenGRK4andAT1receptorweredeterminedby co—immunoprecipitation．[。HIthymidineincorporationwasusedtodetectchangesofcellproliferation．Results Ascomparedwith thecontrolcells，A142V-transfectedcellshadhigherGRK4activityandhigherATlreceptorexpression；therewaslink