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青岛农业大学学报 (自然科学版) 30(3):195~199,2013
JournalofQingdaoAgriculturalUniversity (NaturalScience)
文章编号 :1674—148X(2013)03—0195一O5
H9亚型禽流感病毒 SYBRGreenI荧光定量
RT—PCR法检测方法的建立
徐守振 ,尹燕博
(青 岛农业大学动物科技学院,山东 青 岛 266109)
摘要 :RT—PCR扩增 H9亚型禽流感病毒 (AIV(H9))的HA基 因保守片段 ,将其克隆到 pMD18一T载体 ,经测序验
证正确作为阳性质粒。以阳性质粒为标准品,建立 SYBRGreenI荧光定量 RT—PCR的标准曲线。结果表明,该方
法灵敏性可达 74.3copies/~L,且特异性好、重复性佳 。SYBRGreenI实时荧光定量 RT—PCR方法为 H9亚型禽流
感的病原的快速诊断和病毒的定量分析提供重要手段。
关键词:H9亚型禽流感病毒;HA基因;SYBRGreenI荧光定量PCR
中图分类号:$852.65 文献标识码 :A DOI:10.3969/J.ISSN.1674—148X.2013.03.009
EstablishmentofSYBR Green IReal-timeRT—PCR Detecting
H9Avian InfluenzaVirus
XU Shouzhen。YIN Yanbo
(CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine,QingdaoAgriculturalUniversity,Qingdao266109,China)
Abstract:ConservativefragmentofHA geneofAIV (H9)wasamplified byRT—PCR andcloned into
pMD18一T vector.Aftersequencing,thepositiverecombinantplasmidwasacquiredandusedtoestablish
standardcurveoftheSYBR Green Ireal—timeRT-PCR.Theresultsshowedthatthesensitivitywasso
goodthat74.3copies/~Loftheviruscontentcouldbedetected.Furthermore,thismethodwashighlyspe—
cificandreproducible.Itisconcluded thattheSYBR GreenIreal—timeRT—PCR isagoodtechnologyfor
pathogenicdiagnosisandvirusquantificationofAIV (H9).
Keywords:H9N2avianinfluenzavirus;HA gene;SYBR GreenIReal—timeRT—PCR
禽流感 (avianinfluenza,AI)是由于正黏病毒科 养禽生产造成的巨大影响和损失 ,如何快速准确地
流感病毒属 的A 型流感病毒 (AIV)引起 的一种禽 检测 AIV(H9)已成为防控的关键 。
类或人类感染的传染病 。根据AIV的血凝素(HA) 禽流感 AI(H9)与新城疫 (ND)、鸡传染性支气
和神经氨酸酶 (NA)抗原差异,AIV可分为 16个 管炎(IB)临床症状相似 ,给 AI(H9)的诊断造成 了
HA 亚 型 (H1~ H16)和 9个 NA 亚 型 (N1~ 极大困难。传统的病毒分离和血清学诊断方法费时
N9)口]。H9亚型 AIV(AIV(H9))于 1966年在美 费力 ,不利于 AIV(H9)的快速诊断 ;而 常规 RT—
国威斯康星在火鸡中首次发现,自1999年以来也出 PCR方法由于实验
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