HIF-2α基因与人肺腺癌A549细胞株对顺铂耐药性的关系.pdf

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772 ChineseJournalofClinicalMedicine,2013.Vo1.20,No.6 中国临床医学 2013年 12月 第 20卷 第 6期 论著 HIF一2 基因与人肺腺癌 A549细胞株 对顺铂耐药性的关系 吴倩’ 袁凯 钱成 王勇” 童继春 袁卫东¨ (1.南京医科大学附属常州第二人 民医院血液肿瘤科 ,胸心外科 , 江苏常州 213003;2.复旦大学附属 中山医院胸外科 ,上海 200032) 摘要 目的:探讨小干扰 RNA(smallinterferingRNA,siRNA)沉默缺氧诱导 因子 2 (hypoxiainduciblefactor2alpha,HIF一 2a)基 因表达后 ,人肺腺癌 A549细胞株对顺铂耐药性的变化 。方法 :构建靶 向HIF一2d基 因的 siRNA真核表达载体并转染 A549细胞 ,采用 Real—timePCR检测 HIF-2dmRNA的表达 ,采用Westernblotting检测 HIF-2c~及多药耐药基 因1(multidrug resistanee一1,Mdr一1)蛋 白的表达 ,采用 MTT法检测顺铂处理后细胞的存活率。结果 :在 HIF2asiRNA 转染A549细胞后24、 48h后 ,HIF-2d在 mRNA和蛋白水平的表达与空白对照组相 比均显著下调 (均 P0.01),Mdr一1蛋 白的表达水平也 明显降 低 (均 P().05)。与空白对 照组相 比,HIF2dsiRNA组细胞对顺铂 的敏感性 明显增加 ,各 时间点的 IC 值均显著降低 ,差异 有统计学意义(均P().01)。结论:靶向HIF一2“的siRNA表达载体能够有效抑制HIF一2a基因的表达,从而逆转A549细胞 对顺铂 的化 疗耐药性 。 关键词 肺腺癌 ; 化疗耐药 ; 缺氧诱导因子 2a; 小干扰 RNA; 多药耐药基 因 1 中图分类号 R734.2 文献标识码 A RelationshipbetweenHIF一2“GeneandChemotherapyResistanceofLungAdenocarcinomaA549CellstoCis— platin WU Qian L4N Kai QIAN Cheng W_ANG Yong T0NG Jichun 础 N. WP— dong 1.DepartmentofHematologyandOncology, DepartmentofThoracicSurgery,Changzhou SecondPeople’sHospital,NanjingMedicalUniversity,Changzhou 213003,China;2.Departmentof ThoracicSurgery,ZhongshanHospital,FudanUniversity,Shanghai 200032,China Abstract Objective!Toinvestigatetheeffectofsilencinghypoxiainduciblefactor-2alpha(HIF一2a)geneexpressionbysmall interferingRNA (siRNA)onchemotherapyresistanceofA549cellstocisplatin.M ethods:ThesiRNA eukaryoticexpression vectorstargetingHIF一2agenewereconstructedandtransfectedintoA549cells.TheexpressionofHIF2amRNA wasdetected byreal—timePCR.TheexpressionofHIF一2aandmultidrugresistance1 (Mdr-1)proteinsweredetectedbyWesternblotting. MTT assaywasusedtoexplorethesurvivalrateofA549cellsunderthetreatmentof

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