HPLC-MS-MS法测定丙戊酸钠的血药浓度.pdf

长江大学学报 (自科版) 2013年 11月号医学下旬刊 第 10卷第33期 JournalofYangtzeUniversity(NatSeiEdit) Nov．2013，Vo1．10No．33 HPLC—MS—MS法测定丙戊酸钠的血药浓度 向德 尚 (潜江市中心医院药剂科，湖北潜江4331oo) 谢 云 (湖北中医药大学药学院，湖北武汉430065) [摘要] 目的：用 HPLC—MS-MS建立一个有效的方法来测定人体 内丙戊酸钠 的血药浓度。方法 ：Agilent ZORBAX300SB-C18(5gm，2．1mmX150mm)为色谱柱 ，乙腈 ：20mM 乙酸铵水溶液一 55：45(V：V) 为流动相 ，流速 ：0．25ml·min～，柱温：2O℃，进样量 1Ol，内标为替米沙坦 。结果：丙戊酸钠在 0．5 ～ 100ng·ml 范围内线性 良好 ，定量下限为0．5ng ·ml_。，方法学 回收率为 100．5 ～105．4 ， 日内精 密度≤4．6 ， 日间精密度≤4．5 。结论 ：HPLC-MS-MS法测定人体血浆 中丙戊酸钠 的浓度方法简单灵 敏 ，重现性好 。 [关键词]HPLC-MS-MS；丙戊酸钠；替米沙坦；血药浓度 [中图分类号]R914．1 [3t献标志码]A [文章编号]1673—1409 (2013)33一Ol19一O3 丙戊酸钠 (二丙基戊酸钠)在临床上主要用于癫痫病的治疗，它在进入人体后 ，转化为丙戊酸而发挥 作用。测定血药浓度主要以丙戊酸为主Ⅲ ，不同年龄层的人对丙戊酸钠的处置差别也很大 引，所以对丙戊 酸钠血药浓度的测定就显得极为重要。由于丙戊酸钠结构中缺乏有效的紫外吸收[3]，因此常用的检测方法 有荧光偏振免疫法 、高效液相法 ]。现建立 HPLC-MS-MS法来测定人体内丙戊酸钠的血药浓度。 1 实验仪器与试药 1．1 实验仪器 Agilent1200型液相色谱系统 ：四元梯度泵 、在线脱气机 、自动进样器、柱温箱 ；API4000型三重 四极杆串联质谱仪 ，配备 电喷雾 电离源；AB-265S型精密天平 ；XW一80A微 型涡旋混合仪 ；Thermo BR4i型高速离心机 ；UPT优普超纯水机。 1．2 试验用药及试剂 丙戊酸钠缓释片，A药 ，500mg／片 ，赛诺菲制药 ；丙戊酸钠片，R药 ， 500mg／片 ，山东方明药业 ；内标替米沙坦 ，40mg／片，江苏亚邦爱普森 。 2 方法与结果 2．1 色谱条件 色谱柱 AgilentZORBAX300SB-C18(5m，2．1mm×150mm)，流动相 乙腈 ：20mM 乙酸铵水溶 液一 55：45 (V ：V)；流速 0．25ml／ml；柱温 20℃；进样量 10~tl。 2．2 质谱条件 多反应离子检测 (MRM)；正离子 (negative)；气动辅助电喷雾离子化 (ESI)；质谱条件见表 1。 表 1 HPLC-MS-MS法测血浆 中丙戊酸钠 的质谱条件 [收稿 日期]2013—08—30 [作者简介]向德尚 (1969一)，男，副主任药师，硕士，主要从事医院药学工作。 第 1O卷 第 33期 向德尚 等：HPLC—MS-MS法测定丙戊酸钠的血药浓度 2．5．3 回收率、精 密度 取空 白血浆 180~1，按 “2．5．2”项下配制低、中、 高 3个浓度 (丙戊酸钠血浆浓度分别为 1、10、80ng／m1)的质控 (QC)样品， 考察其回收率和精密度，结果见表 2。 2．5．4 基质效应 取空 白血浆 200~1， 除不加标准系列溶液和内标溶液外，按 “2．4”血浆样品处理项下操作 ，取血浆 上 清 液 180ffl，分 别 加 入 低 、 中、 高 3个浓度标准溶液 (1、10、80ng／L) 日aJ《∽H 《0l^fB自《 2O】和内标溶液 (160g／m1)2Ol，加 0 O如O勰O O O O加0 0 0¨O mO O O O O：O 入乙腈 0．2ml，涡旋 50s，高 速 离 心 图2 HPLC—MS-MS法测定血浆中丙戊酸钠线性关系图 (15000r／min)lOmin，取 上清 lO~tl进 样 ，获相应峰面积 。同时取蒸馏水 180~1，加人相应浓度 (1、10、8