MMP-9表达在不同方法获得破骨细胞的比较研究.pdf

昆明医科大学学报 2013，(12)：1—4 CN 53—1221／R JournalofKunmingM edicalUniversity MMP一9表达在不同方法获得破骨细胞的比较研究 杜 明 ，，何 波 ”，张小超 ”，杨雪婷 2]，陆义芹 1l2]，陈 鹏 ”，沈志强 ) (1)昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室，云南 昆明650500；2)云南省第一人民医 院药剂科，云南 昆明 650032) [摘要] 目的 比较基质金属蛋 白酶9 (matrixmetalloproteinase9，MMP一9) 表达在机械法获得破骨细胞 (osteoclasts，OC)和诱导法获得破骨样细胞 (osteoclastlikecells，OLC)的差异 ，为体外培养 OC提供实验依据． 方法 采用机械分离方法 ，从 1d龄 sD大鼠四肢长骨获得成熟 OC；利用 RANKL (100ngm／L)和 M—CSF (100 ngm／L)诱导 RAW264．7细胞形成 OLC．采用免疫细胞化学和原位杂交技术检测不 同方法获得的 OC和 OLC MMP一9蛋白及其mRNA的表达 ．结果 诱导法 12d组的积分光密度和平均光密度均明显高于机械法3d组．结 论 诱导 12d的OLCMMP一9及其mRNA表达的明显高于机械法3d，为OLC提供了进一步的实验数据． [关键词]破骨细胞；破骨样细胞；机械法；诱导法；基质金属蛋白酶9 [中图分类号]R973[文献标识码]A [文章编号]2095--610X (2013)12--0001--05 ComparisonofMM P-9ExpressioninOsteoclastsObtainedby DiaerentMethods DU Ming ，HEBo”，ZHANG Xiao--chao”，YANGxue— tin ，LuYi— qin， ，CHENPeng”， SHEN Zhi--qiang’ (1)PharmaceuticalCollegeKeyLaboratoryofPharmacologyforNaturalProductsofYunnanProvince。 KunmingMedicalUniversity，KunmingYnnnan650500；2)PhramacyDepratment，TheFirstPeople’S HospitalofYunnanProvince，KunmingYnnnan650032，China) lAbstractJ Objective To investigatethe differencesofprotein andmRNA expression ofmatrix metalloproteinase9 (MMP一9) inosteoelasts(OC)andosteoclast—likecells(OLC)obtainedbymechanicaland inducementmethods．Methods Mechanicalseparationmethodwasusedtoseparatematureosteoclastsfrom long bonesofSDratsagedone—day；andinducementculturemethodwasappliedtoinduceOLCbyusingRANKL (100 ng／mL)andM—CSF (100ng／mL) ．TheproteinexpressionofMMP-9wasmeasuredbyimmunocytoehemistryand mRNAexpressionofMMP一9wasassayedbyinsituhybridization．Results Theintegralopticaldensity (IOD) andaverageopticaldensity (AOD)ofpositivecellsinthevisualfieldwerehigh