MZTP02噬菌体tmp基因的鉴定：与尾巴装配相关的蛋白质.pdf

第52卷 第6期 中山大学学报 (自然科学版) Vo1．52 No．6 2013年 11月 ACTA SCIENTIARUM NATURALIUM UNIVERSITATIS SUNYATSENI NOV． 2013 MZTP02噬菌体 tmp基因的鉴定： 与尾巴装配相关的蛋白质 宋少云 ，廖 威 ，陈维春 ，李广宏 (1．中山大学生命科学学院∥有害生物控制与资源利用国家重点实验室，广东广州510275； 2．广西职业技术学院食品与生物技术系，广西 南宁530226； 3．广东医学院生化和分子生物研究所，广东湛江524023) 摘 要：苏云金芽孢杆菌 (Bacillusthuringiensis)广泛用于生物防治，但溶原性噬菌体的随机爆发严重影响了它 的生产。一种新的苏云金芽孢杆菌溶原性噬菌体被分离出来并进行了基因组测序。TMP (tapemeasureprotein) 蛋白质具有协助和控制噬菌体尾巴装配的功能，是噬菌体侵染期间协助其吸附宿主的一种必需蛋白质。使用PCR 方法从MZTP02噬菌体基因组中扩增出tmp基因后，连接到pQE30质粒并用 M15菌株进行表达，获得了相对分 子质量为35000的蛋白质条带；该蛋白质经Ni—NTA纯化后，作为抗原注入新西兰家兔制备获得多克隆抗体； Westernblot分析发现了一条与原核表达大小一致的蛋白质表达带。噬菌体悬浮液混合TMP血清抗体后测定双层 平板的滴度，在噬菌体的侵染复数 (m．o．i)小于 1的情况下，噬菌体的滴度与血清抗体的质量浓度呈反 比关 系。当一定滴度的噬菌体悬液分别混合25 g／mL和250I~g／mL的血清质量浓度时，滴度分别为 1×10pfu／mL 和 2X10。pfu／mL。这一结果表明TMP血清抗体能够与TMP蛋白质相结合，从而导致了噬菌体滴度的降低。 关键词 ：苏云金芽孢杆菌；溶原性噬菌体；tmp基因；原核表达；装配 中图分类号：Q78 文献标志码 ：A 文章编号：0529—6579(2013)06—0114—06 Identificationoftrap Genefrom LysogenicBacteriophageM ZTP02： A ProteinAssociatedwith PhageTailPackaging SONG Shaoyun ，LIAO Wei ，CHEN Weichun ，L1Guanghong (1．StateKeyLaboratoryofBiocontrolandInstituteofEntomologyffSchoolofLifeSciences， SunYat-senUniversity，Guangzhou510275，China； 2．GuangxiVocationalandTechnicalCollege，Nanning530226，China； 3．InsitituteofBiochemistryandMolecularBioloyg，GuangdongMedicalCollege，Zha．jiang524023，China) Abstract：Bacillusthuringiensisiswidelyusedforpestcontro1．However，thefermentationproductionof thisbacterium wasseverelyinfluencedbytheramdom outbreakoflysogenicphagefrom B．thuringiensis． Inthepresentstudy，anovelbacteriophageMZTP02wasisolatedrfom industrialB．thuringiensisstrain MZ1andsequencedofrtmpgeneencodingtailtapemeasureprotein．Byassistingandcontrolthetail packagingofbacteriophage，thepr