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辣椒拮抗内生菌的筛选、鉴定及应用效果评价 答 辩 人：李 娟 专 业：食 品 科 学 导 师：夏延斌 教授 论文章节 第一章：文献综述 第二章：辣椒拮抗内生菌的分离、筛选及鉴定 第三章：响应曲面法优化辣椒拮抗内生菌的发酵条件 第四章：辣椒拮抗内生菌对果蔬采后保鲜作用的研究 第五章：全文结论及创新点 第一章 研究目的与意义 果蔬的采后病害是影响其保鲜和贮藏的主要因素之一，目前使用防腐剂或保鲜剂来减少病害仍是主要措施，但剂量不适易造成过多残留，危害人们的健康；连续使用易诱发病原菌的抗药性。而健康的植物体内存在大量的内生菌，其中有一些对病原菌具有明显的拮抗作用，可作为控制果蔬采后病害的一种新资源，具有良好的应用前景。 从辣椒植物中筛选出能产生抗菌活性高、抗菌谱广、安全的抗菌物质的菌株，为果蔬采后保鲜方面的研究奠定技术与理论基础。 本课题研究的主要内容 　 1、分离和筛选辣椒拮抗内生菌 从健康辣椒植株中经初筛、复筛分离对辣椒疫霉病菌、辣椒黑霉病菌、辣椒炭疽病菌都有明显拮抗作用的内生菌X，通过形态学分析和布鲁克公司UltrafleXtreme MALDI-TOF-TOF生物质谱仪的鉴定，确定菌株所在种属。 2、优化拮抗内生菌株X的培养基和发酵条件 通过单因素试验找出菌株最适宜的生长培养基和发酵条件 ，再利用Minitab15软件设计找出该菌株X对3种病原菌拮抗作用最佳的因素组合。 3、研究拮抗内生菌株X对辣椒采后病害的影响 　　　利用优化得到的最佳的拮抗内生菌的培养条件，在此基础上研究其抑菌效果，并应用到采后的新鲜辣椒果实上，对其进行防腐保鲜的研究，提高辣椒采后的保鲜效果，从而延长贮藏时间。 第二章 辣椒拮抗内生菌的分离、筛选及鉴定 辣椒拮抗内生菌分离筛选及鉴定的实验结果 1、从辣椒植株的各个部位分离得到的内生菌总数为 8.9×104cfu·g-1，其中茎、叶、果实中分离得到内生菌总数分别为2.3×104cfu·g-1、5.8×104cfu·g-1、0.8×104cfu·g-1。其中真菌有6株，细菌有35株，放线菌2株。 2、从不同辣椒品种中分离到的内生菌种类和数量来看，朝天椒中内生细菌相对较多，有103cfu/g级别，其次为线椒，尖椒最少，而不同部位的内生真菌在数量上和细菌差别不大。线椒分离出5种不同细菌，2株不同形态的真菌；柿子椒4种内生细菌，1株内生真菌；朝天椒和尖椒中分别分离出2株和1株内生细菌，无内生真菌。 不同辣椒品种果实内生菌的分布情况 辣椒拮抗内生菌的分离及室内筛选结果 辣椒内生拮抗菌对病原菌的拮抗效果 辣椒内生拮抗菌X对3种病原菌的抑制效果图 辣椒内生拮抗菌X的生理生化鉴定结果 第三章 响应曲面法优化辣椒拮抗内生菌的发酵条件 实验目的：在单因素试验的基础上，运用Minitab15响应曲面法的中心复合试验设计原理对辣椒拮抗内生菌菌株X的发酵条件进行优化，以菌株X对三种病原菌的平均抑制率为指标，优化出抑制率最大的单因素的组合，为提高拮抗内生菌对病原菌的拮抗作用提供一定的基础。 单因素实验：选择6个因素（温度、pH值、接种量、金属离子、碳源、氮源）来测定其对辣椒内生拮抗菌X对病原菌的影响，选出抑制率最大的单因素组合工艺参数。其中，对X抑制病原菌的最适温度为28℃；最适pH值为7.0；最适接种量为1%；最佳金属离子、碳源、氮源分别为NaCl、葡萄糖、酵母膏。 响应曲面法设计：运用Minitab 15数据统计分析软件使用未编码单位对试验数据进行多元回归拟合分析，设接种量、酵母膏、葡萄糖、NaCl，分别记作A、B、C、D，为4个自变量，设五个试验水平，分别以-2、-1、0、l、2进行编码，编码表采取全因子，共31个实验的实验设计。 单因素实验结果 温度对X抑制病原菌的影响 pH值对X抑制病原菌的影响 接种量对X抑制病原菌的影响 金属离子对X抑制病原菌的影响 不同碳源对X抑制病原菌的影响 不同氮源对X抑制病原菌的影响 响应曲面法优化辣椒拮抗内生菌X的发酵条件的结果分析 响应曲面优化辣椒拮抗内生菌X的发酵条件的结果 为了验证响应曲面法的可靠性，同时考虑到实际操作的可行性，将上述单因素组合工艺条件修正为：接种量为0.80%,酵母膏为0.5%,葡萄糖为2.5%，NaCl为0.13%。 第四章：辣椒拮