红细胞渗透脆性与白细胞染色实验总结ppt.ppt

室温下羊血红细胞的变化比较明显，部分细胞形状变化严重，大多变瘪，甚至有镰刀状红细胞出现。 可以推断在正中情况下检测出的红细胞脆性肯定与在体的规则球形红细胞的渗透脆性不同。 38℃下保存的羊血红细胞变化情况不如25℃的明显，但是依然可以看出红细胞已经发生变形，表面凹凸不平，呈现不规则块状、椭圆状、三角状。 51℃下保存的羊血红细胞发生严重的变形。大多数红细胞变瘪，呈镰刀状或飞碟状。我们推测高温使血液蒸发失水，血液中离子等溶质浓度升高，渗透压增大，导致红细胞失水变瘪。 在加入少量 51℃蒸馏水稀释后，部分细胞干瘪情况减轻，形状又恢复，但仍有许多飞碟状、镰刀状细胞。可见这种变化是多方面的，高温对红细胞的活性产生了不可逆的影响。 表7. 离体3h不同温度下的羊血红细胞脆性 标号 实验温度/℃ 最大抵抗力 组别 最大抵抗力浓度（mmol/L） 最小抵抗力组别 最小抵抗力浓度（mmol/L） A1 1 6 78 5 86 A2 25 6 78 4 95 A3 38 6 78 5 86 A4 51 6 78 5 86 表8. 离体5h不同温度下的羊血红细胞脆性 标号 实验温度/℃ 最大抵抗力 组别 最大抵抗力浓度（mmol/L） 最小抵抗力组别 最小抵抗力浓度（mmol/L） A1 1 6 78 4 95 A2 25 6 78 4 95 A3 38 6 78 5 86 A4 51 6 78 5 86 表9. 离体12h不同温度下的羊血红细胞脆性 标号 实验温度/℃ 最大抵抗力 组别 最大抵抗力浓度（mmol/L） 最小抵抗力组别 最小抵抗力浓度（mmol/L） A1 1 6 78 4 95 A2 25 6 78 4 95 A3 38 6 78 5 86 A4 51 6 78 5 86 表10. 25℃ 下探究更准确的最大最小抵抗力 试管号 试液 1 2 3 4 5 6 7 8 170mmol/LNaCl（ml） 1.28 1.26 1.24 1.22 1.08 1.06 1.04 1.02 蒸馏水（ml） 0.72 0.74 0.76 0.78 0.92 0.94 0.96 0.98 NaCl浓度（mmol/L） 109 107 105 104 92 90 88 87 实验结果 1、2、3、4、5、6管皆为上层透明红色，下层浑浊红 7、8管为透明红色 1.4得出结论： 温度对红细胞的形态有影响，其中高温（51℃）对红细胞形态影响最大； 相同温度下，红细胞的脆性随时间的增长而变大； 相同时间下，1℃和51℃下红细胞脆性变大速度较室温和体温快，温度偏离体温程度越大，越容易使红细胞脆性增大； 保存环境的温度对红细胞的形态有很大影响。 实验2、红细胞在不同浓度低渗氯化钠溶液中溶血率的测定 2.1概述： 传统的测定方法采用目测观察其溶血情况,需要静置一小时后观察, 观察过程中不能晃动。此法仅能观察到溶血的大致情况, 不能量化红细胞破裂的程度。本试验采用分光光度法精确测定红细胞在低渗氯化钠溶液中的溶血情况。进一步了解血红蛋白的脆性。 2.3实验步骤 2.3.1配制不同浓度低渗氯化钠溶液 取口径相同、清洁干净的小试管做好编号, 制成不同浓度的低渗盐溶液, 每管总量为3.0mL，第11管为蒸馏水,具体配制情况见如下表所示： 试管号 试液 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 170mmol/LNaCl （ml） 2.1 1.95 1.8 1.65 1.5 1.35 1.2 1.05 0.9 0.75 2.7 0 蒸馏水（ml） 0.9 1.05 1.2 1.35 1.5 1.65 1.8 1.95 2.1 2.27 0.3 3.0 NaCl浓度 （mmol/L） 120 112 104 95 86 78 69 60 52 43 194 0 2.3.2 最大吸收波长测定 取12管加入0. 1 mL血液, 轻轻颠倒混匀5 min,3 000 r/min离心10 min, 取上清液至比色皿中, 以11管 (生理盐水）为空白对照,754N紫外可见分光光度计上扫描,测得其最大吸收波长为590nm. 2.3.3 红细胞在不同浓度低渗氯化钠溶液中溶血率的测定 依次向12支试管内各加0.1ml血液,轻轻颠倒混匀5min置入干燥离心管中以3000r/min 离心10min,取上清在分光光度计590nm波长处检测。 用11管生理盐水的上清调零,测其他每管吸光度。 以12管测出的吸光度作最大溶血的吸光度,分别计算出1- 10支管的溶血率。 溶血率 = （样品吸光度/最大溶血吸光度）×100% 。 表12 不同浓度低渗氯化钠溶液对红细胞渗透脆性的影响 试管 标号 NaCl溶液浓度（mmol/L） OD值 溶血率（%） 目测法