蛋白质分离纯化与鉴定.ppt

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蛋白质分离纯化与鉴定

蛋白质分离纯化与鉴定 —综合性实验;1、从血清获得高纯度的白蛋白 2、掌握蛋白质盐析、 G-25葡聚糖凝胶层析脱盐、DEAE-纤维素离子交换层析、 SDS电泳的原理与实验操作技术 3、掌握考马斯亮蓝G250染色法定量检测蛋白质的原理和操作方法 4、了解紫外检测仪、自动部分收集器、记录仪、恒压高位槽的原理与使用方法;实验流程;柱层析实验装置;柱层析实验 仪器一:HD-3紫外检测仪;柱层析实验 仪器二:BSZ-100自动部份收集器;使用方法;柱层析实验 仪器三:LM17型记录仪;使用方法;实验原理一:盐析;实验操作一:盐析;实验原理二:凝胶层析;Table. Physical Characteristics of Polydextran Gels;; 实验操作二: G-25葡聚糖凝胶层析脱盐; 实验原理三: DEAE-Cellulose离子交换层析;;实验操作三:纯化;实验操作三:纯化;实验原理四:蛋白质定量;优点:①与凯氏法及Lowry法相比操作简便,能???时测定多个样品;②敏感度高于Lowry法;③复合物颜色稳定;④对干扰剂无Lowry法及紫外吸收法那样敏感。 缺点:①有时会有非特异性吸附,同等量的不同种类蛋白质测定值之间可能会有较大的偏差;②要求样品完全溶解;③样品不能回收使用;④高浓度的Tris、EDTA、尿素、甘油、蔗糖、丙酮、硫酸铵和去垢剂等对测定有干扰作用。 ;实验操作四:蛋白质定量;实验原理五:SDS电泳;上电极缓冲液;实验操作五:SDS电泳;2. 样品处理:;3. 上样:;4. 电泳:;思考题

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