实验二-培养基的配置与灭菌.ppt

微 生 物 学 实 验 实验二 细菌培养基的配制与灭菌 实验目的： 1．掌握细菌常用培养基以及培养条件； 2．熟悉高压蒸汽灭菌的基本原理及应用。 培养基 人工地将多种物质按各种微生物生长的需要配制而成的一种混合营养基质，用以培养或分离各种微生物。 营养成分：碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素、水、pH 按培养基成分分类 ①天然培养基： 主要成分是复杂的天然有机物质，如马铃薯、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、血清等。 例如牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯培养基等。 ②合成培养基： 用化学成分完全了解的纯试剂配制而成的培养基。 如高氏1号培养基，查氏培养基等。 ③半合成培养基 按培养基的物理状态分类 ①固体培养基： （琼脂、明胶和硅胶）为固体培养基。 可供分离、鉴定、活菌计数、菌种保藏等用。 ②半固体培养基： 在液体培养基中加入少量凝固剂 0.6－0.8%琼脂 常用作细菌动力检查和菌种保存、噬菌体制剂的制备 ③液体培养基：常用于生理代谢的研究和工业发酵 培养基配制原则 ①成分来源丰富，便宜，尤其是对于工业化生产用菌的培养； ②碳氮源比例要合适； ③pH值范围要适合所培养的菌种。 培养基的制备过程： 配料—溶解—校正pH值—加凝固剂—融化—过滤—分装—加棉塞、包扎—灭菌—无菌检查。 高压蒸汽灭菌 原理：增加灭菌器内的压力，使沸点增高，得到高于100℃的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，其原因有三： 一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低， 二是湿热的穿透力比干热大； 三是湿热的蒸汽有潜热存在，能迅速提高被灭菌物体的温度 ②常用灭菌方法： 一般培养基用0.1Mpa，121℃ 15—30分钟。 灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等具体情况而有所改变。 含糖培养基用0．05 Mpa，112℃灭菌15分钟，为了保证效果，可将其他成分先行121℃，20分钟灭菌，然后以无菌操作手续加入灭菌的糖溶液。 ③实验室中常用的高压蒸汽灭菌锅有立式、卧式和手提式 实验内容： 1、麦芽汁培养基(酵母+霉菌)： 共取200ml 其中取20ml，4支试管*5ml/支 其中取剩余180ml/250ml三角瓶，并加入3.6 g (2%) 琼脂，包扎灭菌 2、细菌肉汤培养基 牛肉膏：0.5%；蛋白胨：1%；NaCl：0.5%。pH 7.2-7.4。 1）配制160ml液体肉汤培养基 ①先80ml水放于烧杯中，然后称取蛋白胨1.6g，氯化钠 0.8g，牛肉膏0.8g（一载玻片放于台秤上，将牛肉膏0.8g放于其上，称所需量，然后把牛肉膏和载片一同放入烧杯中）。 ②稍微加热溶解，但不要把水烧开。 ③补足80ml水量。待冷却。 ④测pH值，用NaOH调pH值至7.5-7.6 （接近时逐滴加入） 2）取120ml液体肉汤培养基完全转入250ml三角瓶中，加琼脂2.4g，包扎标记灭菌。3）取出40ml液体肉汤培养基倒入200 ml三角瓶中，加入0.8g琼脂 (2%)，先划线标记 水位，放在电炉上加热溶解，加水补齐水位，然后用分液器分装，5ml/支，共6支试管，分装后立即冲洗分液器，以免凝固。 3、PDA 每组两支，每组交两支试管（带试管塞），用于做青霉和假丝酵母小室， 2*2ml*15组=60ml 一 实验目的 1．掌握细菌常用培养基以及培养条件； 2．熟悉高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围； 3．掌握高压蒸汽灭菌的操作方法。 二 实验原理 1．培养基定义 2．培养基分类 ①成分不同分为：天然、合成、半合成 ②物理状态不同分为：固体、半固体、液体 ③用途不同分为：基础、营养（富集）、鉴别、选择 3．培养基配置原则：来源丰富、碳氮比、pH值 4．高压蒸汽灭菌的原理和操作步骤 ① 原理： ②干热灭菌和湿热灭菌的区别：温度、时间、效果 ③操作步骤（实际演示和讲解） 三 实验内容 1. 肉汤培养基的配制2．高压蒸汽灭菌： 121℃，20分钟 3．摆斜面 4．无菌检查 四 注意事项